脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程 刚开始做希望大家多多帮忙

张荣华

求教脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程

hengton

$ j0 X! l5 Q& r! W

+ p: s9 w8 m4 N- [! f, R7 ?/ t2 `* w8 \* l5 G: p
1. 将分离机采集细胞缓慢加在细胞分离液上，体积比为1:1，800g，室温离心20分钟；$ f* \- e$ h& C" i  l& s  y
2. 收集界面的白色絮状细胞加入30ml的低糖DMEM培养基，轻轻吹打混匀，300g，室温离心10分钟；
, f$ W1 X, o  U* U8 A3. 重复离心洗涤共3遍；
: B" o/ G1 W/ X) l  z$ J  O4. 收取细胞轻轻吹打混匀，加入无血清培养基及IFN-γ 置37℃、5% CO2 孵箱中培养；
8 ]! p  y/ m; Z8 x. J5. 24 h后加入IL-2 ，CD3 ，IL-1  继续培养，；
% v5 V; }# W; N& n& G& R6. 每天观察细胞生长状态并根据情况进行换液及加入IL-2 进行扩增；4 n) c& X6 J5 \: J
7. 细胞收集：第14-20天收集细胞，离心弃上清液，用生理盐水洗涤细胞2 次以上，重新混匀，悬于100～200 ml 输注用生理盐水中。1 _& k" S- |, ^  y

zgzy

建议在培养第8天左右及回输病人前做细胞质量检测及活性检测，以确保安全性和细胞活力

cheeray

脐带血 应该跟采集外周血培养差不多吧。。

张荣华

回复 hengton 的帖子
8 ~/ g, q) h; s& E  _8 T% V
* J8 o+ a& O& ^+ k. m请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现溶解的状态，细胞膜开始模糊，这是什么原因呢

张荣华

回复 cheeray 的帖子8 @/ Y) V% }& G* ~4 }1 w. j
; D$ N  d. [- P/ n
不知道是不是差不多，那你们外周血的过程是怎样的？能否让我参考一下

hengton

张荣华 发表于 2015-8-25 15:15 ; B/ n, L( Y6 x* o+ b) b! [# M
回复 hengton 的帖子
' i3 M7 _/ n* ^- y. e6 u) B8 S8 G5 E: D# \* `3 H
请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现 ...

4 C$ C2 ~$ M, N: ^( i6 X3 [: d
1、密度一般是保存在1.0-2.0*10^6个/ml左右。这样细胞生长比较好。+ M5 _0 E( X7 i$ {! w5 Y9 l$ _2 {
2、你用的是什么培养基，会不会是NaCl浓度导致的细胞胀破？

张荣华

回复 hengton 的帖子$ y7 d! E0 w% y. L
. ^+ C. Q5 s. i
我用的是GT-551培养基  

鸵鸵

回复 张荣华 的帖子, y( Q+ T( e3 i( Y
3 ^6 u2 |+ d5 W& K& K$ M+ ?+ ]
我们用的是1640，接种密度和楼上一样，没有出现过细胞破裂的情况，而且细胞在5-9天是增殖高峰期，建议楼主换一种培养基做下对比实验看看

张荣华

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: Q% Q5 m4 ?# S1 u. U# E
8 R0 S0 F9 e( V6 |5 X+ ]好的，谢谢你！还想请教一下你们吸取白膜层大概能吸取多少毫升？