脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程 刚开始做希望大家多多帮忙

张荣华

求教脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程

hengton

5 K, H! U+ O! ^4 c+ }* m- p  ]5 T
+ u2 J- |- p4 S; j

9 G$ x! Z/ M) t) w  I" l1. 将分离机采集细胞缓慢加在细胞分离液上，体积比为1:1，800g，室温离心20分钟；
" b3 g) D, ]8 |$ m6 _. M2. 收集界面的白色絮状细胞加入30ml的低糖DMEM培养基，轻轻吹打混匀，300g，室温离心10分钟；+ r/ x" y  R0 \
3. 重复离心洗涤共3遍；: S% K+ v# @' }; ]' D
4. 收取细胞轻轻吹打混匀，加入无血清培养基及IFN-γ 置37℃、5% CO2 孵箱中培养；
3 h6 p' y0 L( ~3 P! M2 @  ]5. 24 h后加入IL-2 ，CD3 ，IL-1  继续培养，；
- o8 J8 l% t. e, R# q, j5 S' j6. 每天观察细胞生长状态并根据情况进行换液及加入IL-2 进行扩增；  W1 I, Y; C3 `" {  D
7. 细胞收集：第14-20天收集细胞，离心弃上清液，用生理盐水洗涤细胞2 次以上，重新混匀，悬于100～200 ml 输注用生理盐水中。# n; v, u% P, M9 `" ]3 X7 a: a$ \

zgzy

建议在培养第8天左右及回输病人前做细胞质量检测及活性检测，以确保安全性和细胞活力

cheeray

脐带血 应该跟采集外周血培养差不多吧。。

张荣华

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) S* Q% O1 `4 a7 O( W5 i+ b6 N0 e9 p( L
请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现溶解的状态，细胞膜开始模糊，这是什么原因呢

张荣华

回复 cheeray 的帖子" F  [+ ^9 y. A# m7 f$ u6 }, X% ^

3 C/ u! I/ x. z! d6 j& o, K不知道是不是差不多，那你们外周血的过程是怎样的？能否让我参考一下

hengton

张荣华 发表于 2015-8-25 15:15 * A, j. g) s; N
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3 v+ m' _5 o' z* \6 ^+ ?  l/ i4 _# e" \) ^
请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现 ...

, c9 [+ [5 `, k$ {. {" k1、密度一般是保存在1.0-2.0*10^6个/ml左右。这样细胞生长比较好。" U6 P! l( Z( z! ?
2、你用的是什么培养基，会不会是NaCl浓度导致的细胞胀破？

张荣华

回复 hengton 的帖子# V$ z  w* `* |1 d% B

! [0 V" E+ F  e" W( {我用的是GT-551培养基  

鸵鸵

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7 ~1 j! b5 t: N! f; E" f. J# b. f& N
我们用的是1640，接种密度和楼上一样，没有出现过细胞破裂的情况，而且细胞在5-9天是增殖高峰期，建议楼主换一种培养基做下对比实验看看

张荣华

回复 鸵鸵 的帖子  S$ W; y/ O2 @. y4 Y  q- @* R- D7 D

' |; o* y' }5 Z* T( t; U6 }9 _好的，谢谢你！还想请教一下你们吸取白膜层大概能吸取多少毫升？