脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程 刚开始做希望大家多多帮忙

张荣华

求教脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程

hengton

, f! K. i3 E8 @* z) Z1 f' l; A
3 m' L% @+ V, f: o
0 e1 `* r! c- {1. 将分离机采集细胞缓慢加在细胞分离液上，体积比为1:1，800g，室温离心20分钟；- p) M2 O8 k- O4 [0 z- I
2. 收集界面的白色絮状细胞加入30ml的低糖DMEM培养基，轻轻吹打混匀，300g，室温离心10分钟；
0 A+ g0 g, g6 F3. 重复离心洗涤共3遍；) d3 K9 F7 v: A9 z+ w1 v' x$ k; ~
4. 收取细胞轻轻吹打混匀，加入无血清培养基及IFN-γ 置37℃、5% CO2 孵箱中培养；+ N6 O5 P) ^8 t2 y; `
5. 24 h后加入IL-2 ，CD3 ，IL-1  继续培养，；
' d6 ]; N' a- T9 l5 R6. 每天观察细胞生长状态并根据情况进行换液及加入IL-2 进行扩增；4 y, q( m: @9 ]- o" J4 h+ s. w3 \
7. 细胞收集：第14-20天收集细胞，离心弃上清液，用生理盐水洗涤细胞2 次以上，重新混匀，悬于100～200 ml 输注用生理盐水中。
, S$ ~  k+ z0 Y' j4 P1 N9 M

zgzy

建议在培养第8天左右及回输病人前做细胞质量检测及活性检测，以确保安全性和细胞活力

cheeray

脐带血 应该跟采集外周血培养差不多吧。。

张荣华

回复 hengton 的帖子
; _8 B" F& o9 @# t" G3 z  P# F0 U/ X
请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现溶解的状态，细胞膜开始模糊，这是什么原因呢

张荣华

回复 cheeray 的帖子+ }& P, F8 p& w. h! n

+ b: }4 a4 \# i1 a6 X# k2 h不知道是不是差不多，那你们外周血的过程是怎样的？能否让我参考一下

hengton

张荣华 发表于 2015-8-25 15:15
* y9 ~3 F1 y% _% N  o回复 hengton 的帖子3 I. h/ v7 E8 n

3 H( m4 M/ ^' y* J3 S请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现 ...

$ C$ H: B: Q3 ~$ q& C( ^  f
1、密度一般是保存在1.0-2.0*10^6个/ml左右。这样细胞生长比较好。
# Z! |  ~& y% a1 a! u2、你用的是什么培养基，会不会是NaCl浓度导致的细胞胀破？

张荣华

回复 hengton 的帖子/ Q& `$ U5 n5 r0 m" K7 d

$ \/ z5 p) Y( H8 B我用的是GT-551培养基  

鸵鸵

回复 张荣华 的帖子' N$ F3 l. j0 E, d$ q

1 {: U# c5 Q' k9 H我们用的是1640，接种密度和楼上一样，没有出现过细胞破裂的情况，而且细胞在5-9天是增殖高峰期，建议楼主换一种培养基做下对比实验看看

张荣华

回复 鸵鸵 的帖子
: d+ r. {& E" @+ q3 Z" e" z" G
! R6 R3 L1 z! e7 E7 [" {好的，谢谢你！还想请教一下你们吸取白膜层大概能吸取多少毫升？