脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程 刚开始做希望大家多多帮忙

张荣华

求教脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程

hengton

4 l/ n3 K# A4 p  \8 X4 i% X
# ], j2 ]9 ~3 q# g- K% L2 @

  n& j0 q1 h9 X& R( S& l' b, Y1. 将分离机采集细胞缓慢加在细胞分离液上，体积比为1:1，800g，室温离心20分钟；
+ i' [2 t0 c) H; j9 C; F" E9 ^2. 收集界面的白色絮状细胞加入30ml的低糖DMEM培养基，轻轻吹打混匀，300g，室温离心10分钟；0 h. }9 i8 `. _' j
3. 重复离心洗涤共3遍；3 K; L3 f' H* ^- g9 H; N
4. 收取细胞轻轻吹打混匀，加入无血清培养基及IFN-γ 置37℃、5% CO2 孵箱中培养；
1 D7 D, R6 F0 e# a* y" s, b5. 24 h后加入IL-2 ，CD3 ，IL-1  继续培养，；, ~$ m/ G8 G8 B9 [
6. 每天观察细胞生长状态并根据情况进行换液及加入IL-2 进行扩增；) \9 r8 U8 k5 |$ J4 t1 F! a' b) A
7. 细胞收集：第14-20天收集细胞，离心弃上清液，用生理盐水洗涤细胞2 次以上，重新混匀，悬于100～200 ml 输注用生理盐水中。0 W( X4 c5 I4 m

zgzy

建议在培养第8天左右及回输病人前做细胞质量检测及活性检测，以确保安全性和细胞活力

cheeray

脐带血 应该跟采集外周血培养差不多吧。。

张荣华

回复 hengton 的帖子; ]' g5 `, G- Z* w

, K. n' d! y: @0 O7 A. k/ N请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现溶解的状态，细胞膜开始模糊，这是什么原因呢

张荣华

回复 cheeray 的帖子5 C! m' v* N9 P: l6 T5 O
* ~: a( G$ J+ H. i
不知道是不是差不多，那你们外周血的过程是怎样的？能否让我参考一下

hengton

张荣华 发表于 2015-8-25 15:15 9 G6 y/ P( C: U! ]& V
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! v+ r% k4 y$ ?# S. V, J1 H5 u: T" ^% v3 Y  _
请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现 ...

/ X/ u6 J/ }. z5 B" O% t1、密度一般是保存在1.0-2.0*10^6个/ml左右。这样细胞生长比较好。2 ?. q" c, _6 b1 A- r5 Y& R$ I
2、你用的是什么培养基，会不会是NaCl浓度导致的细胞胀破？

张荣华

回复 hengton 的帖子9 {) _/ H. \+ H" Z

/ a' P& t9 q* {9 c我用的是GT-551培养基  

鸵鸵

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; E% b8 U  d: T0 e
$ p. ^" k$ @" R- I我们用的是1640，接种密度和楼上一样，没有出现过细胞破裂的情况，而且细胞在5-9天是增殖高峰期，建议楼主换一种培养基做下对比实验看看

张荣华

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) l. N* Q# N" O
/ x: b; B4 O% _9 D  B  U: a/ w好的，谢谢你！还想请教一下你们吸取白膜层大概能吸取多少毫升？