脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程 刚开始做希望大家多多帮忙

张荣华

求教脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程

hengton

4 h8 `5 W9 g, Y9 x0 L
$ ~9 ?! m2 C) L8 h
4 V4 M7 _/ k, t9 I' s9 }" o& R. D3 n1. 将分离机采集细胞缓慢加在细胞分离液上，体积比为1:1，800g，室温离心20分钟；
( [9 w) V  L( \% |& g2. 收集界面的白色絮状细胞加入30ml的低糖DMEM培养基，轻轻吹打混匀，300g，室温离心10分钟；
1 o! W) V6 U  V# A2 h% Z6 i+ k3 k3. 重复离心洗涤共3遍；8 c; G  a8 U" k
4. 收取细胞轻轻吹打混匀，加入无血清培养基及IFN-γ 置37℃、5% CO2 孵箱中培养；( R- h: }/ P2 W7 G
5. 24 h后加入IL-2 ，CD3 ，IL-1  继续培养，；. u" O# X6 I  a+ E5 z
6. 每天观察细胞生长状态并根据情况进行换液及加入IL-2 进行扩增；
+ ?8 C. w- N) l' G+ n) t7. 细胞收集：第14-20天收集细胞，离心弃上清液，用生理盐水洗涤细胞2 次以上，重新混匀，悬于100～200 ml 输注用生理盐水中。
0 o% P8 d( N1 o) Y

zgzy

建议在培养第8天左右及回输病人前做细胞质量检测及活性检测，以确保安全性和细胞活力

cheeray

脐带血 应该跟采集外周血培养差不多吧。。

张荣华

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% d& n, X, D5 h请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现溶解的状态，细胞膜开始模糊，这是什么原因呢

张荣华

回复 cheeray 的帖子" W4 T" `7 m% s- o
- \8 o9 G2 o( \2 c5 B6 ~5 _
不知道是不是差不多，那你们外周血的过程是怎样的？能否让我参考一下

hengton

张荣华 发表于 2015-8-25 15:15
0 Z+ O( N' ~2 X$ c, j; P3 }回复 hengton 的帖子3 j( s( Q4 k. d) V8 x
" F8 t# ^7 ^3 `. v
请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现 ...

' t* E. _9 m. S( r' |6 m! c5 H9 {
1、密度一般是保存在1.0-2.0*10^6个/ml左右。这样细胞生长比较好。! T3 S! Z& P  J; D0 Q  p# H0 B
2、你用的是什么培养基，会不会是NaCl浓度导致的细胞胀破？

张荣华

回复 hengton 的帖子& W; a; A$ h5 A* a8 A
. r' ]6 P2 x, F' n
我用的是GT-551培养基  

鸵鸵

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我们用的是1640，接种密度和楼上一样，没有出现过细胞破裂的情况，而且细胞在5-9天是增殖高峰期，建议楼主换一种培养基做下对比实验看看

张荣华

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6 K& [# B5 b& N' l; O6 o5 |5 I
好的，谢谢你！还想请教一下你们吸取白膜层大概能吸取多少毫升？