自体血清的获取

醉心科研

请教有经验的研友：5 `1 g% s( Z" k7 Y' u- k: O1 D
免疫细胞培养中有时候会添加自体血清，都怎么得到的呢？* r& x9 z0 I. L$ v
1 单独用无抗凝剂的管取一管: ?5 O1 |9 j, h3 z; ]3 O5 W5 A
2 抗凝管取血离心后取上清1 a# s' r0 W. t3 {" A

3 C0 k1 g" q/ ]- t1 k用1比较奢侈，我用2，但灭活发现变浑浊，高速离心也无法澄清。* l) ~1 C# H9 s8 y3 k
有没有更好的处理方法？还是我的方法有不对的地方？

guanjun1314

血浆，56℃灭活30min,4℃冰箱30min,2000转/10分钟离心备用，4℃冰箱保存。

Anne_Yu

第一天培养的时候会用抗凝管取血离心后取上清，后面补液加的血清是，细胞分离时的上清液取出来56度灭活得到的。

momoenn

浑浊也没事，起作用的蛋白已经变性了，只要你灭活到位，把浑浊的血浆加入培养液中培养没有问题。

3254938

醉心科研 发表于 2015-10-15 12:59 ; @$ J8 j* K1 P
回复 3254938 的帖子' J" }, M1 K: M- ]* N) X0 C
3 b9 ?2 K+ _; c
临床上是这样做的吗？分PBMC后的血浆能用于患者细胞培养不

5 n% O- \3 j5 m" R! M  r  S+ F
目前临床上大多用自体血浆，但是使用前一定要先灭活，至于灭活里面的什么成分，楼上有人回答你了，前期按5%的比例加，后期使用完了，细胞也长起来了

御剑红尘

对于血清灭活的问题，首先要搞清灭活的目的，选择56℃灭活不外乎是灭活可能存在的病毒或灭活补体物质。灭活过程中可每隔几分钟微微晃动利于充分灭活。然后是离心速度和时间的，曾经试过高速（约1000G）还是有悬浊物，这时可暂时不吸出上清，4℃冰箱过夜，悬浊物沉淀下去，小心吸到另外一个无菌容器即可。

醉心科研

回复 3254938 的帖子% L$ g. p' u7 _5 I- u$ J
! J4 s7 n2 v6 v5 d6 g* E/ b
临床上是这样做的吗？分PBMC后的血浆能用于患者细胞培养不

3254938

你要是觉得混。。可以考虑直接用盐水稀释全血，分PBMCs后取上清作为血浆用，常规灭活。。一般问题不大。。% b0 p! C% Z% [8 j
全血如果直接离心取得上清，没有灭活好，容易导致细胞前期出现一层的絮状物。。。损失大量细胞。。

醉心科研

2 }! U/ q* N5 h: x% C

roosevelt9999 发表于 2015-10-14 11:07 8 S) g4 \. C! F! X5 ^
将采的外周血均匀的分到离管内，以3000转，8分钟，升速为9，降速为6，放于离心机内离心；离心完后，吸取上层 ...

* \8 w+ c- B: y; e0 H# |# I5 a# \

$ h* }, N- ?! W  x7 ?非常详细，谢谢！我得好好试试。

醉心科研

回复 ganggangtry100 的帖子
. j$ G- a% r7 l6 F0 G2 O" w# x( P4 c! b! \* X9 l
嗯，血浆。过滤是个办法，但恐怕滤器滤不了几毫升就堵了。