自体血清的获取

醉心科研

请教有经验的研友：
* A6 p2 U4 [( W1 b5 c免疫细胞培养中有时候会添加自体血清，都怎么得到的呢？3 l) }$ J. Q7 R$ w- [5 l
1 单独用无抗凝剂的管取一管; w" e* h- F( o# ^9 o6 u6 f
2 抗凝管取血离心后取上清
0 l9 B' f" A' _6 i* T' g; V% Q: N: I: C4 n7 |; S) U
用1比较奢侈，我用2，但灭活发现变浑浊，高速离心也无法澄清。9 O3 J5 u! f8 t4 H% M4 T! B
有没有更好的处理方法？还是我的方法有不对的地方？

wuhuaguo88l

抗凝血离心2000rpm，10min,注意将离心机降速减小些，吸取上清，56度灭活，再次离心，去掉沉淀，就可以用于后续细胞培养。

醉心科研

wuhuaguo88l 发表于 2015-10-13 16:08 . G( P8 z- @3 b) F! D
抗凝血离心2000rpm，10min,注意将离心机降速减小些，吸取上清，56度灭活，再次离心，去掉沉淀，就可以用于后 ...

+ D6 J1 t2 @8 g6 p1 v  f8 d很详细，多谢。2 ~  H, Z" H* N- V3 j
跟我的差不多，但是我转速没你高。" x/ \9 g3 z. \# P- A, }8 s
灭活后我也离心去沉淀了，但是结果没有灭活前澄清了，你觉得可能是哪里的问题？

ganggangtry100

离心去除血细胞，取上清，灭活，可以很好的培养细胞，但该物质准确点说应该是血浆，不算是血清。# y$ r4 V& E- H- G. v' u
因为血浆在灭活的过程中，很多蛋白会热变性析出，即便是高速离心，有些蛋白也是很难沉淀下来，你可以使用0.22um针头滤器过滤一下，立马和之前一样澄清了。

roosevelt9999

将采的外周血均匀的分到离管内，以3000转，8分钟，升速为9，降速为6，放于离心机内离心；离心完后，吸取上层的血清，密封好后，置于恒温（56度）的水温锅内30分钟，等时间到后，取出放于室内，等到室温后，再放于4度冰箱10分钟左右，取出以3000转，8分钟，升降都为9离心，即可得到比较清的血清。以后用之前，再离心一次，看看是否还有沉淀。一般这样操作之后，血清无沉淀。

醉心科研

回复 ganggangtry100 的帖子
$ H: {( y+ N7 F8 r
& f+ m3 C( ~! t7 e7 E嗯，血浆。过滤是个办法，但恐怕滤器滤不了几毫升就堵了。

醉心科研

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roosevelt9999 发表于 2015-10-14 11:07
& ~( y+ g' e, U; P9 z将采的外周血均匀的分到离管内，以3000转，8分钟，升速为9，降速为6，放于离心机内离心；离心完后，吸取上层 ...

. S, ?9 M% V+ K
2 ^1 B! P- c" O! w, y' a% n非常详细，谢谢！我得好好试试。

3254938

你要是觉得混。。可以考虑直接用盐水稀释全血，分PBMCs后取上清作为血浆用，常规灭活。。一般问题不大。。) E. c4 l6 ~1 c4 Z' D0 \- t
全血如果直接离心取得上清，没有灭活好，容易导致细胞前期出现一层的絮状物。。。损失大量细胞。。

醉心科研

回复 3254938 的帖子2 X1 o) E/ c6 J' {/ E2 U
0 `* @2 |2 U& @; }( z
临床上是这样做的吗？分PBMC后的血浆能用于患者细胞培养不

御剑红尘

对于血清灭活的问题，首先要搞清灭活的目的，选择56℃灭活不外乎是灭活可能存在的病毒或灭活补体物质。灭活过程中可每隔几分钟微微晃动利于充分灭活。然后是离心速度和时间的，曾经试过高速（约1000G）还是有悬浊物，这时可暂时不吸出上清，4℃冰箱过夜，悬浊物沉淀下去，小心吸到另外一个无菌容器即可。