贴块法培养MSC，脐带的处理若干问题

jifengtang

最近一直在培养脐带间充质干细胞，对于脐带处理流程有些问题需要求教一下：
" I0 C  o% l; j0 E- x8 L& q一、首先我想问一下脐带的结构，看到网上有一些说法，脐带最外层是羊膜组织，再里面是华通氏胶，再往里是比较松软的结缔组织，里面包裹2根动脉一根静脉。
% H" m: `/ Z/ e! z, n6 w8 y/ `4 Z- }二、我处理的流程：是把脐带冲洗后剪成小段，除去血管里残留的血，将脐带从中间剖开，去除静脉动脉和结缔组织，用手术刀切成2mm3的小块，然后贴块，培养瓶先用血清润洗。6 K* x$ V$ k( i! G
: ]& M, [$ G! a8 d2 c7 S# @
问题1：, t9 Q6 U" c, F% q* {& p( _( Q
网上看到的脐带结构的说法是否准确？  y4 y* R$ d6 c1 O' R
问题2：
) n7 r' \5 j, n5 Q/ z处理时不剥离羊膜，原代细胞爬出影响有多大？% r! C  V6 Q) Q& t, [! A8 \) b
问题3：: {$ a8 |1 K3 s7 G/ L. H  V
里面的结缔组织是否需要去除，如果去除不干净会有什么影响？( t! i! A0 ~; g( F
问题4：4 w& R# e. T% }" r8 ^% W; f  e& w
一般最后都是用剪刀剪碎华通氏胶，用手术刀切成小块有什么不一样？
' A4 ]) c& m* G9 z

wuhuaguo88l

问题1：网上图片还是比较准确的
! t+ ^" K3 n, o5 V, N问题2：一般是要去除羊膜的
0 J8 ^# K1 z9 ~4 Y4 i9 x  Z问题3：去除三根血管和羊膜后，剩下的都可以用来做原代2 r3 ~5 E9 x: R0 C( S
问题4：剪刀剪碎比较方便，手术刀貌似不好用。

haibara007007

1：结构非常准确，就是这个样子
# }% [1 X" c4 R5 r, F3 f) M3 c2:去除比较好，不然细胞会有一些显上皮状5 }/ q1 p; Q6 B  z9 F+ Q
3：可以不去除
* C! A2 U0 j$ u% K6 v, e1 K- ~: S4：一般都是用剪刀，区别的话，这个还真没做过

chuanbaozang

同意楼上几位的回答

fuyinsheng

1、结构没有问题- q3 [4 ]$ j" W0 V9 ^
2、一般需要将华通式胶单独分离下来，以确保细胞纯度，因为羊膜上皮细胞生长条件与间充质相似，已造成混杂
# R3 c+ d# c5 z, x* i' p. H) d3、去除血管的同时尽量将残留的血管壁等杂志从华通式胶上分离下来
# }. k3 X3 ?' i- {4 S4、刀切的组织块相对较大，降低了细胞爬出的效率，剪刀更细碎一些

月_幻影

1.结构正确；" l. R7 M# m8 [9 L2 f. Y9 B
2.做原代一般建议剥离羊膜；
9 r5 {$ W8 A6 Q1 O6 i6 n! H5 c3.我们做的时候一般是将脐带剖开，去除三根血管然后直接用镊子从羊膜上往下撕华通式胶；
+ x) E# ]" @/ w* x2 r/ y4.通常使用剪刀剪碎后铺瓶培养，用刀切似乎不太方便也没有剪刀剪得碎。

jifengtang

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( J0 U& g7 |4 J4 h" }3 g3 [8 Z2 Q& g7 h- ^( N' V% N' j: f
我刚做时间不长，羊膜和华通氏胶有些分不太清楚，请问羊膜厚度大概有多少？

fuyinsheng

回复 jifengtang 的帖子
8 o0 E/ J, x' U1 |3 R# ?7 z
* c- f4 O: V/ o; @% u羊膜非常薄，百十微米左右，最外面一小层

小豆芽

1、结构式正确的；
9 f0 ]  }# \4 F8 `1 Z+ U: Q2、在组织块贴壁培养时，一般是需要剥离羊膜的，这样可以保证细胞的纯度，同时也有利于细胞爬出；" ~) X- b  _6 _: D3 v
3、最好是能够去除，当然不去除也不会有太大影响，可以进行原代培养；9 s# d, z2 [$ g6 n+ s3 A, z# J* f: j
4、用刀切的话，操作不如剪刀方便，而且刀切组织块比较大，没有剪刀剪得碎。

redmaple

为保证细胞的纯度，还是要剥离；5 L5 y) w$ s& u6 ~( n
不剥离，杂质太多，影响细胞的生长