有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，

ych123

有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，非常感谢，，，

杏色玻璃

收集您的细胞，pbs洗后离心弃掉PBS，加所检测的抗体，4℃孵育半小时，拿出来后加差不多3mlpbs后在离心，弃上清加大约200ul左右pbs轻弹混匀就可上机了

yingfeixiang

1. 消化收集所需细胞数，离心洗涤弃掉培养基，PBS悬浮细胞。. g7 d+ s" ?8 {: ?6 e
2. 准备流式上样管，分别加入相应抗体：
1 i, e$ e/ ~; S3. 每管加入细胞悬液，与流式抗体混匀，4℃避光孵育30min。9 T/ s: M) ~, n6 a" N' `
4. 加入PBS缓冲液2ml混匀，1500rpm离心10min洗涤细胞。
/ n0 c  a$ h* T5. 弃上清，加入1%多聚甲醛悬浮细胞。' {) A) d% A* ]. v" D
6. 200目尼龙网过滤，准备上机检测。

ych123

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# h% A( _3 K. i& u( E4 j: K2 Z0 R  }! L  k
好的，谢谢你

ych123

回复 yingfeixiang 的帖子& d+ S  w, ^7 ?3 t
6 y/ ?& M; W! N5 e: U+ ]/ l
非常感谢，今天做了一次，一个t25瓶子分装6管，在上机的时候就因为细胞数太少而失败了，伤心啊

sajiemeian

是好少啊，T75的分10个也太少

daviddow

细胞数量太少了，一般应该10^6细胞

ych123

回复 sajiemeian 的帖子2 n8 I) O# r" ]9 o8 v* G

- x' p8 s  G9 C- P' G/ NT75的不是可以收获2*10^7细胞吗，怎么会少呢

ych123

回复 daviddow 的帖子- J! f' q, c  ~/ e

$ H& @% _. }+ g; w2 @8 e" t是的，但是我看T25的瓶可以收获5*10^6细胞的以为够了，后面白白浪费一瓶细胞，主要脐血间充质干细胞培养起来确实不易啊

daviddow

回复 ych123 的帖子' z- {  B& J% Q3 {
  M! E$ t6 G9 X7 u. i
这个细胞培养起来应该很容易，而且生长速度很快。就是可能传代不能太多