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有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗,,,,,,   [复制链接]

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楼主
发表于 2015-11-25 17:22 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗,,,,,,非常感谢,,,
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沙发
发表于 2015-11-26 09:50 |只看该作者
收集您的细胞,pbs洗后离心弃掉PBS,加所检测的抗体,4℃孵育半小时,拿出来后加差不多3mlpbs后在离心,弃上清加大约200ul左右pbs轻弹混匀就可上机了
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金话筒 优秀会员

藤椅
发表于 2015-11-26 11:51 |只看该作者
1. 消化收集所需细胞数,离心洗涤弃掉培养基,PBS悬浮细胞。% t) W8 L& F! f- V4 s" m0 Q/ |- V
2. 准备流式上样管,分别加入相应抗体:- [7 Y- D- C  }" ]% k
3. 每管加入细胞悬液,与流式抗体混匀,4℃避光孵育30min。
9 A4 i0 @, j# v1 Q* P- j" t4. 加入PBS缓冲液2ml混匀,1500rpm离心10min洗涤细胞。
( t( ^/ Z; `$ k0 |  o9 n5. 弃上清,加入1%多聚甲醛悬浮细胞。
! m5 `2 ^6 z) D6 t) Q1 K" |6. 200目尼龙网过滤,准备上机检测。
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板凳
发表于 2015-11-26 15:36 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
回复 杏色玻璃 的帖子
. T3 c/ Z5 V1 l* d9 B) h5 @
. F; e4 m; a3 p  v好的,谢谢你

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报纸
发表于 2015-11-26 15:37 |只看该作者
回复 yingfeixiang 的帖子
& a6 ]# A9 P+ M0 D" s" o# _  G5 s6 [  i' v! ^
非常感谢,今天做了一次,一个t25瓶子分装6管,在上机的时候就因为细胞数太少而失败了,伤心啊
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地板
发表于 2015-11-26 15:55 |只看该作者
是好少啊,T75的分10个也太少
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发表于 2015-11-26 17:43 |只看该作者
细胞数量太少了,一般应该10^6细胞
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发表于 2015-11-26 22:37 |只看该作者
回复 sajiemeian 的帖子
- T7 Y  t' I, G- `4 T8 d6 Z9 d- X6 x2 \4 ]+ e5 t- h; F9 z. J
T75的不是可以收获2*10^7细胞吗,怎么会少呢
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发表于 2015-11-26 22:39 |只看该作者
回复 daviddow 的帖子# S* G  b$ _4 K  U+ p! l) V
5 L) y2 q% ?8 z! L
是的,但是我看T25的瓶可以收获5*10^6细胞的以为够了,后面白白浪费一瓶细胞,主要脐血间充质干细胞培养起来确实不易啊
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发表于 2015-11-27 06:26 |只看该作者
回复 ych123 的帖子  C' G. N' Q9 \7 D/ I" d

8 p, z# S/ x* ^这个细胞培养起来应该很容易,而且生长速度很快。就是可能传代不能太多
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