有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，

ych123

有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，非常感谢，，，

杏色玻璃

收集您的细胞，pbs洗后离心弃掉PBS，加所检测的抗体，4℃孵育半小时，拿出来后加差不多3mlpbs后在离心，弃上清加大约200ul左右pbs轻弹混匀就可上机了

yingfeixiang

1. 消化收集所需细胞数，离心洗涤弃掉培养基，PBS悬浮细胞。1 g' k* q0 w/ a9 g' f4 N
2. 准备流式上样管，分别加入相应抗体：
8 E; ]0 O7 B2 K8 K8 M3. 每管加入细胞悬液，与流式抗体混匀，4℃避光孵育30min。
& o0 O0 r2 {1 k5 ]; O5 C4. 加入PBS缓冲液2ml混匀，1500rpm离心10min洗涤细胞。
) f( x, i  w, `5. 弃上清，加入1%多聚甲醛悬浮细胞。  N0 y: ?4 z& c& l
6. 200目尼龙网过滤，准备上机检测。

ych123

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% y. g# A* D' T( J+ V% ^# G: S, p
: f+ F1 T- t' W& a4 \好的，谢谢你

ych123

回复 yingfeixiang 的帖子+ t, n# k/ K2 b$ k4 l
" B2 t; ~8 K# c& v2 j" m
非常感谢，今天做了一次，一个t25瓶子分装6管，在上机的时候就因为细胞数太少而失败了，伤心啊

sajiemeian

是好少啊，T75的分10个也太少

daviddow

细胞数量太少了，一般应该10^6细胞

ych123

回复 sajiemeian 的帖子
1 \' w/ \9 O: e# Y  ]* o+ ~  i- B0 d! x& ^
T75的不是可以收获2*10^7细胞吗，怎么会少呢

ych123

回复 daviddow 的帖子4 x, }3 o, k6 \5 n: f, x6 R1 l
! u. c- O& J- P& R: ~7 n- ^( ]" @
是的，但是我看T25的瓶可以收获5*10^6细胞的以为够了，后面白白浪费一瓶细胞，主要脐血间充质干细胞培养起来确实不易啊

daviddow

回复 ych123 的帖子& e+ E. J' |$ c: @& ]4 O, a# d0 M

; X8 ^2 H/ J2 Z. W这个细胞培养起来应该很容易，而且生长速度很快。就是可能传代不能太多