有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，

ych123

有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，非常感谢，，，

杏色玻璃

收集您的细胞，pbs洗后离心弃掉PBS，加所检测的抗体，4℃孵育半小时，拿出来后加差不多3mlpbs后在离心，弃上清加大约200ul左右pbs轻弹混匀就可上机了

yingfeixiang

1. 消化收集所需细胞数，离心洗涤弃掉培养基，PBS悬浮细胞。4 l" e/ g7 j# F3 I
2. 准备流式上样管，分别加入相应抗体：; T7 q  R5 i( c' `0 H: H" S
3. 每管加入细胞悬液，与流式抗体混匀，4℃避光孵育30min。- e7 C  a# c5 z" _2 v! F% i
4. 加入PBS缓冲液2ml混匀，1500rpm离心10min洗涤细胞。' o3 I# K# |) x/ ^- @* i* N  m& ^
5. 弃上清，加入1%多聚甲醛悬浮细胞。# l; }  i8 H0 Y' ~2 N" z" ], }
6. 200目尼龙网过滤，准备上机检测。

ych123

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: {( G. l3 Y: c0 M/ X: N4 E
7 b" K" z/ R: Y6 K! Q6 I% X好的，谢谢你

ych123

回复 yingfeixiang 的帖子8 t/ z2 j8 w0 u! Q

. v6 {7 R2 L% }) o+ r( v& x非常感谢，今天做了一次，一个t25瓶子分装6管，在上机的时候就因为细胞数太少而失败了，伤心啊

sajiemeian

是好少啊，T75的分10个也太少

daviddow

细胞数量太少了，一般应该10^6细胞

ych123

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3 S! v2 S0 n" v! |8 I5 {9 \& {" ^+ v8 d9 ~$ }7 ~2 e* B6 F
T75的不是可以收获2*10^7细胞吗，怎么会少呢

ych123

回复 daviddow 的帖子+ v$ ^6 g4 B& o8 e
& I7 V3 x  V' F1 b1 k$ {4 n' }
是的，但是我看T25的瓶可以收获5*10^6细胞的以为够了，后面白白浪费一瓶细胞，主要脐血间充质干细胞培养起来确实不易啊

daviddow

回复 ych123 的帖子( L. }( `0 M. w7 A) d! m; e
+ T! d$ i1 C3 O5 I0 H. p
这个细胞培养起来应该很容易，而且生长速度很快。就是可能传代不能太多