有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，

ych123

有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，非常感谢，，，

杏色玻璃

收集您的细胞，pbs洗后离心弃掉PBS，加所检测的抗体，4℃孵育半小时，拿出来后加差不多3mlpbs后在离心，弃上清加大约200ul左右pbs轻弹混匀就可上机了

yingfeixiang

1. 消化收集所需细胞数，离心洗涤弃掉培养基，PBS悬浮细胞。$ P3 q+ m( S7 U' P; O7 W' T
2. 准备流式上样管，分别加入相应抗体：
, P# }: f4 W8 g! E3. 每管加入细胞悬液，与流式抗体混匀，4℃避光孵育30min。7 L6 ^4 z- Z1 K' ^4 E, @: Q3 ?
4. 加入PBS缓冲液2ml混匀，1500rpm离心10min洗涤细胞。6 O* g! e( L! e) y. t
5. 弃上清，加入1%多聚甲醛悬浮细胞。0 x" Q$ s3 O$ l% E& X- A& X- g5 y! y
6. 200目尼龙网过滤，准备上机检测。

ych123

回复 杏色玻璃 的帖子1 ~* ]  D$ \  ]( _% c

. T$ z  x! M3 c" r" e! H) V好的，谢谢你

ych123

回复 yingfeixiang 的帖子4 m6 K: Y3 r  [+ O9 i5 Z' S' k

, ^* J0 x1 X- A8 b+ A' o非常感谢，今天做了一次，一个t25瓶子分装6管，在上机的时候就因为细胞数太少而失败了，伤心啊

sajiemeian

是好少啊，T75的分10个也太少

daviddow

细胞数量太少了，一般应该10^6细胞

ych123

回复 sajiemeian 的帖子4 `6 ?2 g2 b6 v. f4 v" v

5 E! }' g7 _. ^1 DT75的不是可以收获2*10^7细胞吗，怎么会少呢

ych123

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) j: Z: T# `0 a# O2 g0 d) b
5 U* [* y* Q2 e7 m* \+ b是的，但是我看T25的瓶可以收获5*10^6细胞的以为够了，后面白白浪费一瓶细胞，主要脐血间充质干细胞培养起来确实不易啊

daviddow

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- m. h3 M8 {1 C( W
1 `( r  N% B, s1 \( R这个细胞培养起来应该很容易，而且生长速度很快。就是可能传代不能太多