有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，

ych123

有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，非常感谢，，，

杏色玻璃

收集您的细胞，pbs洗后离心弃掉PBS，加所检测的抗体，4℃孵育半小时，拿出来后加差不多3mlpbs后在离心，弃上清加大约200ul左右pbs轻弹混匀就可上机了

yingfeixiang

1. 消化收集所需细胞数，离心洗涤弃掉培养基，PBS悬浮细胞。% t) W8 L& F! f- V4 s" m0 Q/ |- V
2. 准备流式上样管，分别加入相应抗体：- [7 Y- D- C  }" ]% k
3. 每管加入细胞悬液，与流式抗体混匀，4℃避光孵育30min。
9 A4 i0 @, j# v1 Q* P- j" t4. 加入PBS缓冲液2ml混匀，1500rpm离心10min洗涤细胞。
( t( ^/ Z; `$ k0 |  o9 n5. 弃上清，加入1%多聚甲醛悬浮细胞。
! m5 `2 ^6 z) D6 t) Q1 K" |6. 200目尼龙网过滤，准备上机检测。

ych123

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. T3 c/ Z5 V1 l* d9 B) h5 @
. F; e4 m; a3 p  v好的，谢谢你

ych123

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& a6 ]# A9 P+ M0 D" s" o# _  G5 s6 [  i' v! ^
非常感谢，今天做了一次，一个t25瓶子分装6管，在上机的时候就因为细胞数太少而失败了，伤心啊

sajiemeian

是好少啊，T75的分10个也太少

daviddow

细胞数量太少了，一般应该10^6细胞

ych123

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- T7 Y  t' I, G- `4 T8 d6 Z9 d- X6 x2 \4 ]+ e5 t- h; F9 z. J
T75的不是可以收获2*10^7细胞吗，怎么会少呢

ych123

回复 daviddow 的帖子# S* G  b$ _4 K  U+ p! l) V
5 L) y2 q% ?8 z! L
是的，但是我看T25的瓶可以收获5*10^6细胞的以为够了，后面白白浪费一瓶细胞，主要脐血间充质干细胞培养起来确实不易啊

daviddow

回复 ych123 的帖子  C' G. N' Q9 \7 D/ I" d

8 p, z# S/ x* ^这个细胞培养起来应该很容易，而且生长速度很快。就是可能传代不能太多