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有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗,,,,,,   [复制链接]

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楼主
发表于 2015-11-25 17:22 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗,,,,,,非常感谢,,,
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沙发
发表于 2015-11-26 09:50 |只看该作者
收集您的细胞,pbs洗后离心弃掉PBS,加所检测的抗体,4℃孵育半小时,拿出来后加差不多3mlpbs后在离心,弃上清加大约200ul左右pbs轻弹混匀就可上机了
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金话筒 优秀会员

藤椅
发表于 2015-11-26 11:51 |只看该作者
1. 消化收集所需细胞数,离心洗涤弃掉培养基,PBS悬浮细胞。4 l" e/ g7 j# F3 I
2. 准备流式上样管,分别加入相应抗体:; T7 q  R5 i( c' `0 H: H" S
3. 每管加入细胞悬液,与流式抗体混匀,4℃避光孵育30min。- e7 C  a# c5 z" _2 v! F% i
4. 加入PBS缓冲液2ml混匀,1500rpm离心10min洗涤细胞。' o3 I# K# |) x/ ^- @* i* N  m& ^
5. 弃上清,加入1%多聚甲醛悬浮细胞。# l; }  i8 H0 Y' ~2 N" z" ], }
6. 200目尼龙网过滤,准备上机检测。
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板凳
发表于 2015-11-26 15:36 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
回复 杏色玻璃 的帖子
: {( G. l3 Y: c0 M/ X: N4 E
7 b" K" z/ R: Y6 K! Q6 I% X好的,谢谢你

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报纸
发表于 2015-11-26 15:37 |只看该作者
回复 yingfeixiang 的帖子8 t/ z2 j8 w0 u! Q

. v6 {7 R2 L% }) o+ r( v& x非常感谢,今天做了一次,一个t25瓶子分装6管,在上机的时候就因为细胞数太少而失败了,伤心啊
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地板
发表于 2015-11-26 15:55 |只看该作者
是好少啊,T75的分10个也太少
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金话筒 优秀会员

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发表于 2015-11-26 17:43 |只看该作者
细胞数量太少了,一般应该10^6细胞
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发表于 2015-11-26 22:37 |只看该作者
回复 sajiemeian 的帖子
3 S! v2 S0 n" v! |8 I5 {9 \& {" ^+ v8 d9 ~$ }7 ~2 e* B6 F
T75的不是可以收获2*10^7细胞吗,怎么会少呢
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发表于 2015-11-26 22:39 |只看该作者
回复 daviddow 的帖子+ v$ ^6 g4 B& o8 e
& I7 V3 x  V' F1 b1 k$ {4 n' }
是的,但是我看T25的瓶可以收获5*10^6细胞的以为够了,后面白白浪费一瓶细胞,主要脐血间充质干细胞培养起来确实不易啊
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发表于 2015-11-27 06:26 |只看该作者
回复 ych123 的帖子( L. }( `0 M. w7 A) d! m; e
+ T! d$ i1 C3 O5 I0 H. p
这个细胞培养起来应该很容易,而且生长速度很快。就是可能传代不能太多
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