有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，

ych123

有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，非常感谢，，，

杏色玻璃

收集您的细胞，pbs洗后离心弃掉PBS，加所检测的抗体，4℃孵育半小时，拿出来后加差不多3mlpbs后在离心，弃上清加大约200ul左右pbs轻弹混匀就可上机了

yingfeixiang

1. 消化收集所需细胞数，离心洗涤弃掉培养基，PBS悬浮细胞。' a0 s" A% E' g' ?$ `3 A; F
2. 准备流式上样管，分别加入相应抗体：
9 J0 Y  d, M1 L( }# q  S7 C% G( F3. 每管加入细胞悬液，与流式抗体混匀，4℃避光孵育30min。8 i; o3 ~$ }& @2 U  D! c/ q& o
4. 加入PBS缓冲液2ml混匀，1500rpm离心10min洗涤细胞。2 ?& Z, h, j* c, s0 h4 H$ D% R
5. 弃上清，加入1%多聚甲醛悬浮细胞。9 H' m: h8 C5 T$ j
6. 200目尼龙网过滤，准备上机检测。

ych123

回复 杏色玻璃 的帖子  ~% d! X1 G8 L0 Q0 \4 g

( J2 X. U. d9 O* N9 u% H6 \# s好的，谢谢你

ych123

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非常感谢，今天做了一次，一个t25瓶子分装6管，在上机的时候就因为细胞数太少而失败了，伤心啊

sajiemeian

是好少啊，T75的分10个也太少

daviddow

细胞数量太少了，一般应该10^6细胞

ych123

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T75的不是可以收获2*10^7细胞吗，怎么会少呢

ych123

回复 daviddow 的帖子: {# t( |$ G9 O+ C; H7 }: k

5 @& z* X$ H6 D6 u5 D" b, |# O$ }6 U是的，但是我看T25的瓶可以收获5*10^6细胞的以为够了，后面白白浪费一瓶细胞，主要脐血间充质干细胞培养起来确实不易啊

daviddow

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- r* Q2 Y- Y" P0 [+ w, w" X这个细胞培养起来应该很容易，而且生长速度很快。就是可能传代不能太多