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有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗,,,,,,   [复制链接]

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楼主
发表于 2015-11-25 17:22 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗,,,,,,非常感谢,,,
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沙发
发表于 2015-11-26 09:50 |只看该作者
收集您的细胞,pbs洗后离心弃掉PBS,加所检测的抗体,4℃孵育半小时,拿出来后加差不多3mlpbs后在离心,弃上清加大约200ul左右pbs轻弹混匀就可上机了
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金话筒 优秀会员

藤椅
发表于 2015-11-26 11:51 |只看该作者
1. 消化收集所需细胞数,离心洗涤弃掉培养基,PBS悬浮细胞。. g7 d+ s" ?8 {: ?6 e
2. 准备流式上样管,分别加入相应抗体:
1 i, e$ e/ ~; S3. 每管加入细胞悬液,与流式抗体混匀,4℃避光孵育30min。9 T/ s: M) ~, n6 a" N' `
4. 加入PBS缓冲液2ml混匀,1500rpm离心10min洗涤细胞。
/ n0 c  a$ h* T5. 弃上清,加入1%多聚甲醛悬浮细胞。' {) A) d% A* ]. v" D
6. 200目尼龙网过滤,准备上机检测。
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板凳
发表于 2015-11-26 15:36 |只看该作者
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回复 杏色玻璃 的帖子
# h% A( _3 K. i& u( E4 j: K2 Z0 R  }! L  k
好的,谢谢你

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报纸
发表于 2015-11-26 15:37 |只看该作者
回复 yingfeixiang 的帖子& d+ S  w, ^7 ?3 t
6 y/ ?& M; W! N5 e: U+ ]/ l
非常感谢,今天做了一次,一个t25瓶子分装6管,在上机的时候就因为细胞数太少而失败了,伤心啊
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地板
发表于 2015-11-26 15:55 |只看该作者
是好少啊,T75的分10个也太少
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发表于 2015-11-26 17:43 |只看该作者
细胞数量太少了,一般应该10^6细胞
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发表于 2015-11-26 22:37 |只看该作者
回复 sajiemeian 的帖子2 n8 I) O# r" ]9 o8 v* G

- x' p8 s  G9 C- P' G/ NT75的不是可以收获2*10^7细胞吗,怎么会少呢
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发表于 2015-11-26 22:39 |只看该作者
回复 daviddow 的帖子- J! f' q, c  ~/ e

$ H& @% _. }+ g; w2 @8 e" t是的,但是我看T25的瓶可以收获5*10^6细胞的以为够了,后面白白浪费一瓶细胞,主要脐血间充质干细胞培养起来确实不易啊
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发表于 2015-11-27 06:26 |只看该作者
回复 ych123 的帖子' z- {  B& J% Q3 {
  M! E$ t6 G9 X7 u. i
这个细胞培养起来应该很容易,而且生长速度很快。就是可能传代不能太多
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