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有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗,,,,,,   [复制链接]

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楼主
发表于 2015-11-25 17:22 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗,,,,,,非常感谢,,,
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沙发
发表于 2015-11-26 09:50 |只看该作者
收集您的细胞,pbs洗后离心弃掉PBS,加所检测的抗体,4℃孵育半小时,拿出来后加差不多3mlpbs后在离心,弃上清加大约200ul左右pbs轻弹混匀就可上机了
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藤椅
发表于 2015-11-26 11:51 |只看该作者
1. 消化收集所需细胞数,离心洗涤弃掉培养基,PBS悬浮细胞。1 g' k* q0 w/ a9 g' f4 N
2. 准备流式上样管,分别加入相应抗体:
8 E; ]0 O7 B2 K8 K8 M3. 每管加入细胞悬液,与流式抗体混匀,4℃避光孵育30min。
& o0 O0 r2 {1 k5 ]; O5 C4. 加入PBS缓冲液2ml混匀,1500rpm离心10min洗涤细胞。
) f( x, i  w, `5. 弃上清,加入1%多聚甲醛悬浮细胞。  N0 y: ?4 z& c& l
6. 200目尼龙网过滤,准备上机检测。
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板凳
发表于 2015-11-26 15:36 |只看该作者
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回复 杏色玻璃 的帖子
% y. g# A* D' T( J+ V% ^# G: S, p
: f+ F1 T- t' W& a4 \好的,谢谢你

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报纸
发表于 2015-11-26 15:37 |只看该作者
回复 yingfeixiang 的帖子+ t, n# k/ K2 b$ k4 l
" B2 t; ~8 K# c& v2 j" m
非常感谢,今天做了一次,一个t25瓶子分装6管,在上机的时候就因为细胞数太少而失败了,伤心啊
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地板
发表于 2015-11-26 15:55 |只看该作者
是好少啊,T75的分10个也太少
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发表于 2015-11-26 17:43 |只看该作者
细胞数量太少了,一般应该10^6细胞
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发表于 2015-11-26 22:37 |只看该作者
回复 sajiemeian 的帖子
1 \' w/ \9 O: e# Y  ]* o+ ~  i- B0 d! x& ^
T75的不是可以收获2*10^7细胞吗,怎么会少呢
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发表于 2015-11-26 22:39 |只看该作者
回复 daviddow 的帖子4 x, }3 o, k6 \5 n: f, x6 R1 l
! u. c- O& J- P& R: ~7 n- ^( ]" @
是的,但是我看T25的瓶可以收获5*10^6细胞的以为够了,后面白白浪费一瓶细胞,主要脐血间充质干细胞培养起来确实不易啊
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发表于 2015-11-27 06:26 |只看该作者
回复 ych123 的帖子& e+ E. J' |$ c: @& ]4 O, a# d0 M

; X8 ^2 H/ J2 Z. W这个细胞培养起来应该很容易,而且生长速度很快。就是可能传代不能太多
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