从肿瘤组织中获取DC特异性抗原

momoenn

大虾们帮忙看看这是什么情况？
9 w% ], E3 u. V5 P: z第一次做肿瘤抗原制备。前一天临床上采集肿瘤组织后在冰箱里放置，第二天才处理，中间在-20°冰箱放置了。操作：酒精消毒1-2min，经生理盐水清洗3遍，取中间部分剪碎后，放置在细胞筛中研磨，如下图
  p5 @* k% F! Y( C" {平板里放了一些培养基。研磨后取平板里的液体显微镜下观察，并离心，分别得到以下结果。
" L- @0 }) A4 c" Y" x亲们给分析一下这是什么情况，谢谢啦！急问，在线等。

baby00000003

不太了解你这个处理方法是什么原理，可否详细解释下哩？

shunho-cell

貌似产物很少？

momoenn

回复 baby00000003 的帖子3 I& I+ C  o$ E; q8 I2 i2 a# J

4 B& H) m* B, ?我现在还没处理完，后续还应该进行反复冻融，然后离心取上清得到最后产物。只是感觉现在状态不太对。

momoenn

回复 shunho-cell 的帖子( }+ {9 K5 [- s3 s% d

: i3 j) f5 F% N( s( Y研磨后应该得到肿瘤细胞的单细胞悬液，现在显微镜下基本观察不到细胞形态。离心得到的沉淀为什么是红色的呢？

momoenn

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9 a) z( }4 }/ g5 F% q4 ^0 V# s
9 l! ^. f8 `6 r研磨得到肿瘤细胞的单细胞悬液，再经42°和60°灭活。然后反复冻融得到肿瘤抗原。但是现在研磨后的液体看不到细胞形态。离心后颜色还特别红

lgfffancy

目前看，你这种方法你是想获得肿瘤细胞吧

baby00000003

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" v( Z& n5 S* w4 T7 |, N* e' X/ v/ ^# a& k
总之是要破碎细胞获得可溶蛋白呗～7 c; w+ O1 V# k+ B
干脆就操作的时候小心点别污染，给它磨碎了直接反复冻融吧，最后离心的时候，大块和难容碎片也就离掉了
" o( l: l% g- A, J( g7 z: m& ?BCA测测蛋白浓度，调整一下初始的组织块大小，也就O了吧～

momoenn

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# @1 F) k0 y; O- Y: C9 ^0 o: O) S8 L+ A) K- B
中间有一步关键的步骤，是水浴灭活，应该是灭活的酶的活性。如果直接磨碎反复冻融的话，是不是可能会把目的蛋白给消化了。

momoenn

回复 lgfffancy 的帖子0 E& V9 i5 ~1 |3 `* V

5 \  d5 m1 x. T; U昂，得到肿瘤细胞后再反复冻融得到肿瘤抗原