［求助］有关T细胞培养之问题

nailute1985

最近在养T细胞，我们是从cord blood中提的PBMC，然后添加IL2 CD3/28的可溶性抗体刺激，IL2大概500IU／ml， CD3/28 300ng／ml 都是在D0天加的。 现在有几个问题像大家请教一下：" F4 M8 U. `, \8 ~
1、现在是D5，细胞增殖很不明显，而且抱团生长十分严重，基本上我吹散了之后，过10分钟左右就又开始抱团了，这正常么？（脐带血当时没有立即处理，4度放了大概20小时左右做的实验）
  `1 v# o4 \8 ~0 h  O2、本来一开始打算不换液，只补液的，但是从D3开始 培养基发黄了但是细胞数没怎么变，我想还维持原来的细胞密度2*10^6／ml 所以我直接全量换液了，换完液之后补加了IL2，那这个时候我还需要CD3/28再刺激一下嘛？
' N; w+ m: G% F3、D5计数，细胞数比没换液之前还少。
3 e0 j5 u! \( u1 x求解～

娟姐姐

细胞抱团生长是正常情况

nailute1985

回复 娟姐姐 的帖子3 j6 Z2 n9 l/ i" P, {
8 E0 s- F3 W. P6 [7 P  [
主要是抱团太快了，是T细胞典型的特征么？我觉得其他的悬浮细胞没有这种抱团那么快的

娟姐姐

轻轻拍打培养瓶就散开了，悬浮生长的细胞抱团正常

nailute1985

回复 娟姐姐 的帖子6 S% S- B4 E$ P
- I$ Y3 F9 K1 Q$ c
我都是用吹的……

醉心科研

2 m0 ?8 T0 g' W/ [6 a
! ]8 h+ C- d# G3 O: b9 o回复 nailute1985 的帖子8 }1 P9 R& h# j8 o1 s- e- E7 l; s
4 ~2 {* Y0 D8 Q
1 接种密度偏高
$ N: ?" B; t7 h2 前几天不需换液，实在受不了可以补因子。
/ M& [7 V( W: q3 _& n3 前7天计数没有太大参考意义。( x6 @1 t; [) g
4 补因子的时间与外周血培养不同，是因为脐血都是这样补法吗

nailute1985

回复 醉心科研 的帖子& q, v% E2 u" q

' i2 V5 G" m- {: R' [+ S6 E/ ~嗯，我也觉得2*10的6稍微有点高，下次1＊10的6就可以了。其实按说应该是补液的，但是因为前几天细胞消耗培养基太快了，但是细胞不怎么增殖，我如果再补液的话，细胞密度就下降了，我还是想维持这个密度，所以我就全量换了，然后补的IL，现在的问题就是，我全量换液之后，我的CD3/28还需不需要刺激？有一种说法是：CD3/28加完之后T细胞已经是处于激活状态了，换液之后就不需要补了，还有一种说法是CD3/28可溶性抗原需要存在于培养基中持续刺激，换液的话就需要加…这两种说法我不知道哪个对。

riverdtang

2*10^6已经接近生长密度上限了，调到1*10^6甚至5*10^5都可以，T细胞抱团生长很正常，不要吹散，成团有助于其分泌有利的生长因子

醉心科研

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1 \6 r' z) D& [4 ^$ s0 b) Y
3 P$ ?! ^+ i. m" c按外周血T细胞的培养来说，不需要持续加。

nailute1985

嗯嗯 下次我调低点 但是现在我需要计数看看生长曲线，不吹散的话我没办法计数呀，细胞数也不知道了就