免疫细胞分离的几种方法

shy-shen

表面标记分子法
% b; ?2 j2 E8 }% D) YE-花环沉降法
6 a$ z9 Q$ f2 L% Q+ p: ^人类T细胞表面有SRBC受体绵羊红细胞受体，能够与多个SRBC结合，形状如花环；, @! j. \3 ?8 P, w+ O% S
亲和淘洗法
. g; F3 A0 v1 l! Z; p特异性单克隆抗体包被在聚苯乙烯培养皿/板表面，吸附具有相应表面分子的目标细胞，如抗Ig抗体吸附B细胞、抗CD3抗体吸附成熟T细胞，这些都属于正选分离: d: M. U7 q2 k
细胞毒法' N. w, o* L# e% g) V6 G
补体介导的特异性细胞毒分离法，在抗体的作用下裂解能与抗体结合的细胞，从而分离出不能与此抗体结合的细胞群，属于负选方法# r2 Q1 O' E4 C$ P/ m$ O7 y
荧光激活细胞分离法& O) x. v1 E. I+ W6 G4 `! P
最有效法，目标细胞经荧光素标记单抗结合后，在激发光照射下会产生荧光，由FASC分选功能分选出来
5 F0 y' a5 e* q; ]1 y% W3 ~% O免疫磁珠分离法
" K4 U- C& x; s9 a6 P在磁珠表面包被特异型抗体，与目标细胞表面的抗原结合而与特定细胞粘附，再用磁珠分离
( u; {1 V$ A# F
: ]8 B2 P  u% {: x对低渗的敏感性
/ v) w$ s4 A# Z  b红细胞对低渗的敏感性要高于白细胞，例如红细胞裂解液( h& B$ e5 d: E! n0 z6 E
! ]9 r8 E% A- s9 `" o% V9 _$ C  |
相对密度差异# X: {# x2 _2 l6 E" G0 Z
聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法即FICOLL
7 m0 J! z( r1 x: c4 W9 r3 o: ^红细胞和粒细胞相对密度大于ficoll，沉底；血浆密度最低位于最顶端；分层液位于中间，PBMC位于血浆和分层液的白膜层处/ w4 M4 Q3 T) R0 g  l
PERCOLL密度梯度离心法
, R6 k/ \7 K( q5 \* E% Z! Z& z最上层是死细胞残片和血小板，然后是单核细胞层，然后是淋巴细胞层，最后是粒细胞和红细胞- `; a8 P/ u; d0 c- \: ?: j
$ G( h3 Q1 M; z% v- @
黏附和吞噬能力" o- f! ~5 d" \1 h' i) v
单核和巨噬细胞具有较强的粘附能力，加入细微的羟基铁颗粒或乳胶颗粒，待单核和巨噬细胞充分吞噬后，用密度梯度离心或者磁场吸附去除，利用尼龙毛柱分离B细胞。6 }+ t- _: C' x! A. Z) J& R
$ P# l$ `. T1 T
特异性促生长因子
$ r2 B& w9 x2 O5 S利用不同种类的免疫细胞需要的生长因子不同进行促进生长