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询问一个关于基质胶的问题!   [复制链接]

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楼主
发表于 2010-8-11 10:46 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
各位专家们,大家好,做肿瘤干细胞,我看到文献上说可以用ECM gel 铺板培养,我今天询问了这个胶,但不知道具体用法和使用范围及意义,请有用过这玩意的专家给个答案,多谢!
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沙发
发表于 2010-8-11 12:26 |只看该作者
回复 1# ahfjwangrui
- A3 K% j. v. s% j8 L1 y
; @9 D6 H1 n# s, r. e& t2 q  C2 e( U& E% n  \$ _8 U8 ~
    看你要用肿瘤干细胞做什么,基质胶一般用来检测细胞的侵袭、生长能力,如果你要做肿瘤干细胞的克隆、生长能力可以用软琼脂糖克隆实验,不过比较麻烦些
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藤椅
发表于 2010-8-13 09:11 |只看该作者
回复 2# 胡问成 . [, [+ n& T2 W* ~- x" h4 q

4 k, u. F4 B" M5 y
, J  a6 ^2 W6 n: C# Y% q    我是看很多文献说是在培养干细胞时铺板用
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板凳
发表于 2010-8-20 12:07 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
Application:Recommended for use as a cell culture substratum. For a 24-well plate, use 230-250 μl/well. For a 96-well plate, use 50-100 μl/well. Thaw gel overnight at 2-8 °C before use. The thawed gel may be diluted up to two-fold with cold (2-8 °C) Dulbecco′s Modified Eagle′s Medium. Gel dilutions should be made before it is added to the plate. ECM will gel within 5 minutes at 20 °C. For prolonged manipulations, work should be conducted below 10 °C. Dispense gel to wells of a multiwell plate using pipettes pre-cooled to 2-8 °C. A gel forms at 37 °C and maintains this form with culture medium for at least 14 days. Cells may be plated on top of a thin gel layer (0.5 mm) or cultured inside a 1 mm layer. When cultured inside, cells should be added to the gel prior to plating at a recommended density of 3-4 × 104 cells per mL. To dissociate cells from the gel, use protease (dispase) dissolved in PBS without calcium, magnesium, and EDTA at a working concentration of 0.6-2.4 units/ml.
* d4 l6 H# `/ ~3 N! P# b# I; }  Epithelial cells, endothelial cells, muscle cells, nerve cells, tumor cells 7 l. J$ a: e8 w$ x: ~+ U% a* ]4 z
" ~: j  r& |' c% ?, M
Caution:ECM gel may be stored up to 72 hours at 2-8 °C.  r2 G+ m$ [8 t5 I

! o0 A" j' t! m$ e8 f* AOther Notes:ECM gel is composed primarily of laminin, collagen type IV, heparan sulfate proteoglycan and entactin. Approximately 8-12 mg/ml basement membrane matrix protein in Dulbecco′s modified Eagle′s medium with 50 μg/ml gentamicin.* c- R2 l, u, I( m" V
9 M6 |7 i# J7 c4 l, x$ M
Properties8 M) U1 Z6 t4 v$ b% b! O
sterility dialyzed against chloroform ! @2 q% V: G5 J2 o3 C7 \9 ], U+ O8 v
form liquid
/ T; k* ]' p' zconcentration 8 - 12 mg/mL 5 l7 Z) F) l7 q4 I% P5 Y- g3 }
surface coverage 6‑10 μg/cm2 / z8 F2 l; x# |
total impurities endotoxin, tested
0 k/ Z: ?$ Y" b2 b/ U5 B6 \4 x. w  Nsuitability cell culture tested / ^  U2 w8 T, c5 E
shipped in dry ice
/ a" z) _) l1 nstorage temp. −20°C
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报纸
发表于 2013-12-5 21:57 |只看该作者
楼主用基质胶养肿瘤干细胞结果怎么样?CSC能长起来么,会不会分化?
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地板
发表于 2013-12-5 23:57 |只看该作者
我用含生长因子的ECM培养CSCs,in matrigel 会分化,on matrilgel 会出现类似于tubeformation的结果,应该也是一种分化现象。
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发表于 2013-12-6 22:37 |只看该作者
回复 leiwang 的帖子/ R8 ~" m/ h/ T: z8 J; c

5 d! Y5 v* i9 ?9 F$ ?这个分化和生长因子不知道关系大不大,还是matrigel本身基本成分促进了分化?
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发表于 2013-12-6 22:44 |只看该作者
回复 leiwang 的帖子
, T4 ~& c; J/ A' E4 p) N- g. y6 g; J8 m' l
还有请问你培养的时候是无血清培养还是含血清培养?谢谢!

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发表于 2013-12-6 22:57 |只看该作者
生长因子应该很重要,我培养的时候是完全培养基含血清的,就是为了做分化的。
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发表于 2013-12-6 22:59 |只看该作者
忘记说了,有一次我用BD不含生长因子的ECM做分化,效果差很多。生长因子在这里的作用应该是比较重要的。
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