关于Splinkerette PCR的一些疑惑 - 实验室综合讨论区干细胞之家



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楼主: 钻石星辰	go [请教] 关于Splinkerette PCR的一些疑惑 [复制链接]

splinkerette

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21楼

发表于 2011-3-20 11:57 |只看该作者

回复 jiabiaohu 的帖子

呵呵，不客气，祝你实验顺利

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钻石星辰

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22楼

发表于 2011-3-20 16:43 |只看该作者

回复 splinkerette 的帖子3 F6 x7 u1 b. N7 e

你好，请问我合成的splinkerette adaptor 没有按照Nature Method上要求的HPLC纯化，而是用PAGE纯化，对后续实验有影响吗？* N" X3 R& N2 Q6 v

这两种纯化方式有什么不同呢？

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guotao

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23楼

发表于 2011-6-21 09:02 |只看该作者

可不可以用于转基因整合位点的检测呢？

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liulilin

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24楼

发表于 2011-10-28 13:03 |只看该作者

回复 guotao 的帖子2 g/ Z! k$ B( Q% m" F, \/ r/ a

现在我正在做转基因整合位点的鉴定，做三个月了还是没有什么好的结果。痛苦ing

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寒窗飞雪

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25楼

发表于 2012-5-23 12:44 |只看该作者

高通量测序的研究多不多呢

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寒窗飞雪

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26楼

发表于 2012-5-23 12:45 |只看该作者

我对高通量测序比较感兴趣

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langziforever

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27楼

发表于 2012-6-1 23:14 |只看该作者

回复钻石星辰的帖子
' ~+ {$ o3 @) B: R
PAGE胶纯化的效果要比HPLC的效果好呢！所以，肯定是没有问题的！

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langziforever

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28楼

发表于 2012-6-1 23:19 |只看该作者

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3 s- K/ P% }* l
切胶主要是为了让测序结果更好一些，因为在一个等级的片段在上机测序时可以更好地控制时间，因为目前高通量测序都是要做类似于PCR的过程，这个过程就像PCR一样，不同的片段长度需要不同的时间，这就是为什么要切胶的原因，同时，你切的不同长度范围的胶也会让最后测序结果实际长度有个评价的依据，比如，50-100bp范围如果测出500bp的带，那么结果肯定是不可靠的，可能是污染。这也是为什么用4%的胶来分离酶切产物的原因，可以让条带分的更好更细！利于切胶。我觉得测序这块你懂这些应该就可以了，剩下就给公司做吧！只是你需要注意切胶和电泳时尽量小心，避免污染，因为高通量测序是很怕污染的！