成骨成脂诱导液的配方

yangjie0329

有谁知道成骨成脂诱导液的配方，其中成骨成脂诱导液中地塞米松的浓度分别为多少呀？

tangyvhuang

诱导脂肪实验试剂：
* A* v& y; j. ~$ Q, |" N
" F9 j0 s1 j; V/ f3 A诱导剂：（DEX  1um/L,消炎痛 200um/L,   IBMX  0.5mM/L,  胰岛素10ug/ml）& v6 h% ^, b) g
固定液：10%甲醛3 f) S+ p& }. {/ k+ ~/ A. w4 q' {
染色液：油红O 0.5g 溶于100ml异丙醇中。做为储备液室温放置。 临用时取储备液6ml加入4ml蒸馏水中。过滤后并在2小时内使用。
; k1 i- Z' s& ?$ f' g4 U
. q" i+ S# F5 Q8 L+ i1 c2 f操作：1，固定：吸弃培养液后加入固定液5min.+ B+ c  o* H, I0 Y$ y3 h' l
      2,吸弃固定液，加入染色液15min后水洗一次镜检观察
- R" ^5 g) L& l" f

tangyvhuang

诱导成骨实验试剂：
/ {# Z1 J1 D; h7 _9 q" J诱导剂：（DEX  0.1um/L,  β-磷酸甘油 10mM/L,   2-磷酸Vc  50ug/ul,  ）
( E6 p3 n* `+ a* M固定液：甲醛：甲醇=1：9混合， 4摄氏度存放。$ ]& h0 R# U4 x0 J5 m8 B+ |" b5 t
0.2M丙二醇 ：丙二醇2.103g加入蒸馏水100ml ，4摄氏度避光存放。8 _" Y1 S- a. O) ?8 S7 G) t" ~
0.05M丙二醇：0.2M丙二醇12.5ml+ 0.1N HCL  2.5ml 蒸馏水35ml, 4度避光存放。
* N& Z6 [: _  X" o' V  C2 ?  基质液：α萘酚磷酸钠 35mg+坚牢蓝RR 35mg 溶于35ml0.05M丙二醇中
0 j) [7 j0 K4 ~
- K$ [  S" W$ O% p1 }操作：1，固定：吸弃培养液后加入固定液30sec 冲洗，晾干。* G5 m% w* F5 q5 Y
      2,基质液用NaOH调节PH为9-9.6，过滤7 }& I* i" V# |5 E7 S
3，染色30min，最好是13摄氏度水浴- C8 @1 d0 {9 A& ], Q
4，冲洗晾干
9 O, y2 S) s8 o) o! P

yangjie0329

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& i) o- W8 |' L, S4 z. m$ K5 f: W9 }  m) O  P9 v; {! K* R& L
谢谢

zerollx

回复 tangyvhuang 的帖子4 D1 S) t4 ^' V; D! Z! j4 g

3 D4 Y) ^5 G" E4 {2 ?* P2-磷酸Vc 是 50ug/ul还是50ug/ml？

nannan2ping

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% K1 {; _2 \! |( o. o% E# s& u+ o, w! y
应该是50ug/mL吧，也就是50mg/L

ljzmy82

直接到invitrogen 买一瓶成骨分化做得效果跟好，自己配得不是很好用，个人经验！

4445655

成脂诱导培养基主要以DMEM完全培养基为基础并含有10%FBS，1μM /L地塞米松，0.5mM/L IBMX(3-异丁基-1-甲基黄嘌呤),1X ITS(胰岛素铁硒传递蛋白)其中1X ITS可用10μM /L胰岛素，200μM /L吲哚美辛代替。2 R/ J' C6 b) ~0 G' I/ a3 L
成骨诱导培养基主要以DMEM完全培养基为基础并含有10%FBS，100nM/L地塞米松，50μM/L L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐， 10mM/Lβ-磷酸甘油钠，若无L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐可用50mg/L维生素C代替。. W" }3 [* X5 C, ~9 }
希望对你有用。

liuyul03

关于成骨啊，成脂啊诱导液的配置，文章上就有，而且非常成熟了，也有商品化的在卖。