神经干细胞怎么那么难养呢！！

jj2570782

10.1前分离的SD乳鼠（24h内）全脑神经干细胞，分贴壁和悬浮分别进行培养，第一代的时候还蛮好的，但是床贷后生长极其的慢，完全不长，完全培养液（MDEM/F12，EGF,bFGF,B27，P/S）！求大虾们给点指点啊 小弟急需扩增细胞

angelyannan

一般都是先悬浮培养传至一代以后才贴壁培养的，主要目的是使得贴壁培养的神经干细胞纯一些。。传代后生长慢可能有几个原因：首先可能是接种密度过低，接种密度过低的话，细胞之间联系较少可能不利于其生长：另外就是你在传代过程中是否对细胞造成了严重的损伤，细胞损伤严重后可能长不好的。另外你说完全不长时什么概念呢?一般文献上所说的一代和下一代之间的时间段大概是3~5天。不过这个时间也要根据你的取材来源决定，包括细胞密度也是一样的。如果细胞真的状态不好的话建议重新在养，同时也要根据自己的取材来源查找相应文献，然后注意以上几点，试试看~

青云之上

回复 jj2570782 的帖子: E& H) V/ t6 k$ Y. S) |' H

( B. J4 _7 I9 B$ y6 p3 H再加1%N2和谷氨酰胺试试，我那阵用得是icr乳鼠，就加了EGF、bFGF、B27、N2、谷氨酰胺，长得挺好的~~

jj2570782

回复 angelyannan 的帖子5 I+ d6 c7 H; @

" W/ N% k* w2 F5 ^& Q+ F接种密度2x10的5次方，消化用的Sigma的ACCTUASE。分离的时候用ACCTUASE消化切碎的全脑50min，都没用什么大问题的啊！另外，我看过很多文献都是从原代就开始贴壁培养的，不存在先悬浮后贴壁培养的说法!

angelyannan

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3 g5 ]1 P! G0 M; R; l. M' b: }6 W" S/ Y9 i
两种文献我都见过的，我多看过的还是使用第一代神经球用于贴壁的较多。可能我们的实验目的不一样，所以侧重点不一样吧~觉得你的接种密度应该没有什么问题~那不知道你的培养液ph值是否正常~

wangfang

第一代时状态还好证明你的培养液没什么问题，可能是你传代的时间不对，神经球对于环境很敏感，要求较高。如果传代太晚的话，神经球就会分化，因此传代后神经干细胞的数量已经大大减少了，另外，我做神经干细胞的原代时没有消化，剪碎后直接接种，我认为一开始用酶消化会对神经干细胞有很大的影响。

jennyshy

回复 jj2570782 的帖子4 w1 V+ R; L. _9 L# z

: y' z' C! e3 ~& r0 T想知道你贴壁是如何培养的，求protocoll

jj2570782

论坛里有，你搜一下！就是一个NSCs分离视频里面提到的
$ Y  D$ h% I7 E% B; x

catdoctor

取原代的时候建议单纯机械法，消化对细胞的伤害比较大，另外，只取室下区的效果可能更好一点，我见同学这么养的，因子的质量可能也是问题，你换一个试试

jj2570782

机械法的伤害一定比酶的小吗？求证据？？？