求教：成纤维细胞原代状态不好的原因

牙牙丫丫123

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* v- I( {- \, @3 |' {: h- \/ ]我养的是猪的胎儿成纤维洗吧，原代培养方法是0.25%胰酶消化，终止离心后接种，10%FBS的培养液，原来用这种方法培养细胞生长很好，可是这次培养时，第二天细胞长出来就特别老，而且细胞全是小黑点，请问这是什么原因造成的……是血清或者培养液PH值的问题吗？2 [% h4 T& G- `/ p, u% b/ ]1 ^; v

wangshumin12311

这细胞救不回来了，，，重新来过，，，看有没有支原体或者细胞受啥罪了，，，血清正常的话不会出现这情况，，，，话说你是哪个单位，，，做猪的？

牙牙丫丫123

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; d8 ]: F3 f- u2 s1 w, {$ S0 W
您觉得这更像是支原体污染？我是东北农业大学的，我们实验的主攻方向是猪

军医

是不是抗生素加多了？

星移龙一

我们实验猪的用的都是15%~20%的FBS，原代都很好啊，传代生长也很好，不知是不是这个问题。

牙牙丫丫123

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; `9 U8 w6 v: F6 y6 t8 f我加的正常抗生素用量

牙牙丫丫123

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4 b1 j: v* |* v  g. \# Z7 M. w+ L2 t能请问一下您是怎么做原代细胞培养吗？
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牙牙丫丫123

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还有，我这次使用的是10%的培养液，有没有可能是血清质量本身不好，然后再加上血清浓度低，导致细胞营养不良呀……然后细胞就长成这样了
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军医

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! `8 l* ?3 a/ h* M( Z2 F我们用10%的血清养原代也挺好的，是不是时间长了，迁出的细胞长的太密了，生长抑制了

星移龙一

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胎儿的取部分组织，剪碎后涂板培养，% g6 s2 n5 O8 ?/ {+ a% V# s  P' z
成体的一般是耳源的，将毛刮去后，剪碎涂板。