求油红O原液配制详细方法

冰枫de梦

    我是将油红O溶于异丙醇中，但有时溶解不充分有少许沉淀，求解。

zerollx

回复 冰枫de梦 的帖子' d% U4 R' I# ?9 Y# ^: }

% `2 |+ r! e( |% c- b+ R1 G/ ~溶解不了是正常的，稍微颠倒混匀个5~10min，再沉淀一会，直接取上清过滤待用就可以了

tjbone

1.染色液的配制:8 ^& |9 Y4 n+ I; Z, j$ g( e3 ^
材料：油红染料 棕色可密封瓶 异丙醇 研钵 漏斗 定性滤纸
6 j' |% a2 J( c: P$ u8 S- Q称取预先研磨粉碎的0.5g油红干粉，溶于少量异丙醇中，然后加异丙醇至100ml，棕色瓶密封（或锡箔纸包裹避光）4℃保存，为储存液，可长期保存。用时取6ml加三蒸水4ml混匀，定性滤纸过滤，稀释后数小时内用完。5 ^5 J& j' {" R* E
2.10%中性甲醛的配制
2 n" c* A# k7 w* L/ r& K材料：中性甲醛（多聚甲醛） 密封瓶
8 G  q" d/ m- m& Y4 _& R; W称取1g中性甲醛粉末，加入10ml的三蒸水中，密封，在60度水浴中过夜才能溶解。配好的溶液1个星期内有效，最好4度保存。. q/ m6 |7 n8 ?' r2 T7 P7 X
3.染色对象 间充质细胞脂肪诱导后不同时间段。
: w4 g, b% ^) C! x0 b4.培养载体 3毫升培养瓶。如果培养载体为塑料制品，hoechst33342染核的话，塑料板自发荧光也为蓝色，必须考虑。
3 j& H/ L" J0 B& L! b5.染色步骤： 9 m4 ?- ^0 r1 M6 w% {/ i
5.1 先小心轻缓倒去培养夜。
; a3 E- E# J$ V$ w8 o6 [0 Y5.2 用pbs轻缓漂洗（不洗没问题）。' o7 s, x3 I& \4 y4 _! M( Z
5.3 加10%中性甲醛固定30min（实际固定时间过夜都没问题。固定液用95%酒精也可）。固定的是细胞膜。  Y, v7 |# U6 W& t: [
5.4 稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，滤纸过滤，室温放置10min（除去一些杂质，染色结果更清晰）。
5 ^- F: h3 d* Y5.5 染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml（实际染色时间1小时都可以）。
; O& E9 O+ R: P$ R6 _9 K! \" _8 C5.6 脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料（实际用其他平衡液洗也没问题，背景并不会残留多少）。$ _& ^+ R1 R7 _  A: I5 p
5.7 复染，淡苏木染色1/5分钟，pbs漂洗（这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核， hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上）。* D) Q9 Q4 \& f3 }$ W1 a
5.8甘油明胶封片（封片后可长期保存）。
( J% G% t- q$ S+ T5.9 显微镜观察。

mansnoopy

回复 冰枫de梦 的帖子& b) D& y$ S. c+ x
  z+ D: E- Q0 R7 r
你溶完后需要过滤的，千万不能直接用！

冰枫de梦

回复 mansnoopy 的帖子' o1 G% U/ t# Z1 r3 \* D
  I  D; e* D2 T( w* A2 X$ K
谢谢  呵呵

hhxxattxs123

回复 tjbone 的帖子
5 b* [; m1 t& C. B0 D1 R' J' [7 F  b, L* F; j  A8 f
过滤的时候，用什么标准的滤器啊？

天枰2012

回复 hhxxattxs123 的帖子" l6 V" }2 N% w9 b9 V
: l, x9 y  |! n: A
用滤纸