关于胰酶消化细胞

zdgrp

回复 xiongjiedeng 的帖子
7 n; V2 Q- \* p3 q% x+ W* S1 a$ j, ?( I8 s2 A
谢谢！我用的是六孔板，300ul，你说的2ml是用来消化多大的皿/孔？

zdgrp

回复 safflower 的帖子
0 S$ G, m  M2 P0 g& e. A. I
, I6 v8 e4 A, N- f0 P8 |谢谢！刚接触细胞培养，感觉手法对于细胞的状态有很大的影响，确实需要用心摸索！

zdgrp

回复 wuyannini 的帖子
" _0 z- d: p( S' t  n5 h' [0 z% _: {- i1 ^8 V: y4 B  Y
嗯，我都是用PBS（六孔板每孔1ml的量）洗一遍，应该有这方面的原因，谢谢！

zdgrp

回复 mirrida 的帖子
) @2 J) ?  Q! b! ~0 p8 D7 G, @) j" z; a! `1 Z& T2 X0 y
谢谢！但过消化是不是对于细胞状态有不好的影响？

zdgrp

回复 yyshpy 的帖子' z2 f9 F' P8 G
- @% a- N/ s% P- c
谢谢！加消化液一般多长时间，可以在镜下看到你说的那种细胞状况？？

yyshpy

回复 zdgrp 的帖子  y3 f: o2 H- D- o: \

2 h/ O1 K* ?/ A% \% ~/ \1 ^$ k消化液用量尽量少，能轻轻覆盖到细胞就行，消化时间嘛，与细胞属性密切相关，一般1~2min，就可以了

yyshpy

回复 zdgrp 的帖子
4 J) s) t% V; j- e: Z  u
* \7 C! L, W) k消化液用量尽量少，能轻轻覆盖到细胞就行，消化时间嘛，与细胞属性密切相关，一般1~2min，就可以了

xiongjiedeng

回复 zdgrp 的帖子
9 c  l9 P3 V. a3 U6 s5 E1 T
" M9 V: l: ^8 L& u5 Y" s3 b呵呵~我用的是10cm培养皿，那就不用那么多，用个400ul足够了

wangfang

1先将胰酶放在37度中温热 ，因为胰酶最适作用温度是37度。
3 v; v; Z/ {. q1 k' e3 r4 j2然后将培养皿内的培养液吸出
% B, F7 o, l0 [5 {3用DOBS清洗，我们只清洗一遍' E6 s5 C: f' ^1 u. D( G
4加入胰酶，只有完全覆盖住皿底就可以了) v0 G+ r( h$ {' ?6 s
5放回37度培养箱中，待细胞大部分变圆时轻轻的敲打培养皿使细胞飘起来8 `0 k& f1 |/ G; r
6加入终止液，离心即可。5 L- k& D8 ?7 `$ |2 v8 a9 ]
7这里面最重要的步骤就是消化时间的掌握和敲打培养皿的力度

receiver1

如果你感觉胰酶消化的太厉害，可能你的胰酶活力很强，可以把胰酶稀释一下再消化。我就是稀释的，根据自己的需要摸索一下浓度。我用的是0.15%的胰酶