nanodrop2000

如来的观音

大家做蛋白定量到时候，有没有用nanodrop2000（protein A280）测过浓度的？出来结果什么情况代表可用。

langziforever

都是在用nanodrop测，而且很准的，一般看它的扫描图谱，在A280有很好的特征峰就可以，一般为了达到精确定量结果，我们会用盐酸胍对蛋白进行变性处理，将色氨酸等特征吸收峰的基团暴漏出来，这样结果是很准的！

如来的观音

langziforever 发表于 2012-5-5 13:01
, R7 M4 v2 g" ^0 W8 _& Z) o4 ]都是在用nanodrop测，而且很准的，一般看它的扫描图谱，在A280有很好的特征峰就可以，一般为了达到精确定量 ...

1 y& ^* C. p8 i" U
您好，可是我测出来的又两个峰值，近A280一个，近A235处一个，还有个A260/280比值，这个比值有什么讲究吗？

如来的观音

回复 langziforever 的帖子) ^1 D& I4 _7 N" T% u" q
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还有我是直接测的，没用盐酸胍处理，不知这是怎样做的，可以发送一个protocol给我吗？谢谢

aminhair

测蛋白浓度应该做标准曲线吧？这么测准吗？

cochongg

我们实验室，没有啊

shiyi

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纯蛋白的A280/A260应该=1.8，低于这个值说明有核酸污染，你的A280/A260=1.3，蛋白不纯，有核酸污染。DNA的A260/A280为1.8～2.0，而RNA则是2.0。另外，用摩尔消光系数计算蛋白浓度比较准确。

shiyi

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& g6 `7 b; c1 x纯蛋白的A280/A260应该=1.8，低于这个值说明有核酸污染，你的A280/A260=1.3，蛋白不纯，有核酸污染。DNA的A260/A280为1.8～2.0，而RNA则是2.0。另外，用摩尔消光系数计算蛋白浓度比较准确。

如来的观音

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我测了两遍，一遍1.3，随后的是1.7，看来误差也挺大的，再说就算核酸污染对western有影响吗？

shiyi

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4 `* U9 M# u8 C% R3 F! q
, J! u5 z* H' v. T/ c5 W核酸污染对western的影响倒不大，不过你的浓度测不准的话没法做蛋白的定量分析啊（没法确定蛋白的上样量）。这种情况我建议用brandford法测浓度确定蛋白的上样量。