我最近一直在诱导分化MSCs，诱导成骨分化成功，可是为何我诱导成脂细胞不成功呢

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大家好！我最近一直在诱导分化MSCs，诱导成骨分化成功，可是为何我诱导成脂细胞不成功呢，我的诱导方案如下：
1 v4 Z* }  E1 o9 j& J      1μM地塞米松+10μM胰岛素+0.5mM IBMX+100μM吲哚+10%FBS+L-DMEM。请问大家，传统用诱导培养基和维持培养基以2+2形式更换，但是我查过很多中文文献，英文文献只是说用诱导培养基每周更换2次培养基，请问，到底是哪种，还有我用油红染色，以裴雪涛出版的干细胞实验指南的操作进行，结果一次都没染出来，请问甲醇可以固定脂肪细胞吗？谢谢大家帮忙解决这个难题吧

tjbone

不能用甲醇固定，因为甲醇为脂溶剂，小脂肪滴都被溶解了！！  c/ o  A2 {1 j; {5 s$ s2 |
可以用4%多聚甲醛水溶液固定既可！！！！！
# M' c) O+ e4 `9 ]5 _染色之后不能脱水，甘油明胶封片！！

634996425

请问用4%多聚甲醛固定，为何细胞都脱掉了呀

细胞海洋

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1 O) B% A+ O! n! ~, A* ?  [1 R' H% z" d6 q% H
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否则他会看不到

634996425

回复 细胞海洋 的帖子8 y3 w2 K3 e; O

) Z6 S5 m8 w- z谢谢您了，版主您好！帮忙分析一下吧，为何我在诱导成脂细胞过程中，还没到2w就有那么多脂肪滴一样的上浮，并且用油红O染色，可是结果经常出现一大片黑色的，我都不知道那些是什么，因为过去实验室没做过这方面，我是各路求人。我的成脂诱导培养基是低糖DMEM+10%FBS+0.5mM IBMX+1μM地米+10μg/ml胰岛素。我用其进行诱导21天，可是细胞变少了，并且脂滴没有了，一染色一大片黑，我用油红O 0.5%，染色10-15min;目前我查文献看很多人用3+3;2+2；我尝试用诱导和维持培养基做，可是每次换成维持培养基结果第二天很多似脂滴一样的飘起，我用油红O染色结果飘起的出现很多脂滴染色，真让我郁闷，不成功我誓不罢休，可是我需要大家伙帮忙，谢谢了

细胞海洋

# m+ y, [0 I- R2 h/ n1 x3 g) B
6 p1 {" a2 X# l0 y8 j, y0 `! m回复 634996425 的帖子* L  S; n) q& ^9 M+ x+ B) t

7 {: b; m. h4 t, r8 D建议你发新帖提问
7 Y2 I4 M) t$ W* e- V% F; }
+ `- b; ]) n* S" T& s$ e很抱歉 我只是管理员 专业知识很菜的 所以等大家的帮助吧 抱歉了

634996425

回复 细胞海洋 的帖子% f# y6 q( {/ x4 ^/ j+ c, M
! L: E. O3 {% e% V0 o( `
对了，请问国内有哪些著名的干细胞类公司，我想毕业后到他们那里工作，可以帮忙介绍一下吗

细胞海洋

回复 634996425 的帖子$ P% Q; M# j3 f- P! G$ U
8 L+ ^  p( _  A( z1 \2 C
http://rencai.stemcell8.com/index.php
9 c" \/ l+ ~' }* m8 Z# L
1 X( G2 x0 ?% d$ {5 f) S先在人才库登记吧

luckywen

会不会配制诱导剂时溶剂出现问题了，不同诱导物质要求溶于不同溶剂中，最后还需要调ph值。

634996425

我在配制诱导剂时，脂溶的我用DMSO,水溶的用超纯水。应该每问题。胰岛素我用水溶解的