细胞养了2年了，没碰到过这样的情况，大家帮帮忙吧！

yuhaoze

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最近养癌细胞，出现问题：以前的做法是，加上胰酶洗一遍，再加胰酶消化，一直到漂，然后终止消化，细胞状态很好。现在同样的做法，不管消化多长时间，细胞都贴在那里不往下掉，一吹打细胞就碎，没一个活的。4 I4 L* i) f) X4 \/ ~
不知道问题出在什么地方，怎么解决
$ G( I/ R- O3 E* U0 M大家有没有遇到同样的问题

coffee.cat105

你用的什么公司的胰酶、

yuhaoze

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sigma,一直都是这个，你觉得是胰酶的问题？
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yuhaoze

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加上之后倒还真是能看出来有点类似凋亡的特征，但实验室其他人说胰酶很好用啊

coffee.cat105

我们用Hhclone的胰酶也出了问题了，形态什么的都可以，就是流式检测抗体标记不上，正头大呢，所以问问你. ^5 O2 i! g2 Z- U

WAX

你的胰酶是不是粉末自己配制的，如果是，有可能是过保质期，胰酶失效了，消化能力差，损伤了细胞却消化不下来，我们以前遇到过类似的情况

yuhaoze

回复 WAX 的帖子0 a8 g& V1 v' X* V

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3 ~6 x& o* E( i# |; @+ Z如果是这样的话那真需要警惕了

WAX

回复 yuhaoze 的帖子) Y( X9 h5 R8 {" [: z5 ]( B2 R
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粉末也是会过期的，用个两年就差不多了，买一瓶新的吧

yuhaoze

回复 WAX 的帖子8 {" a2 _% ^: m' j* \( A
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好的'谢谢

wangzhiqi86

回复 yuhaoze 的帖子+ I8 F% U$ \+ P
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极有可能是胰酶时间长了之后失活所致，我之前也是在37℃预热时间长了之后细胞怎么也消化不下来，建议你再重新用胰酶粉末再过滤配一瓶试试，里面EDTA也要加的。
! Q9 H, H: z1 L  X* a我的经验是，每次预热的时候，胰酶最后预热，不要超过5min，甚至可以放在室温一段时间就行。很多胰酶并不是在4℃放的时间长了失效的，而是经常性预热失活的。1 s3 g! q- j& ^
胰酶用的是Invitrogen的，一瓶粉末可以用很长时间。配成2×的过滤后分装冻存在-20℃，用的时候再解冻，一个月内没问题。