关于慢病毒转染人脐带间充质干细胞的问题。polybrene、MOI值

quge_00

最近在做慢病毒转染脐带间充质。有做过的，请教一下。4 D* y3 o1 K+ Z: M* l, ~
1、包装细胞接种第二天融合达50%，文献有报道到70%再转染，50%效率是不是高些呢？$ U, ~6 Z, I! u0 g* O- F  f. r
2、为什么要用无双抗的培养液配制病毒液呢？
2 \5 F; @6 H, z  W/ i: J3、转染前用293细胞测滴度不？5 D3 l) [" {' g& @+ I; L
4、文献报道MSC使用慢病毒转染MOI值比较高（10），并且同时还加入了polybrene（8ug/ml），请问您操作时加吗？还是自己梯度摸索呢？
! g$ l! A: ]2 `8 I0 W/ |" w* W. X0 ^  O; }6 F# }6 `

# G1 j. H/ w7 P0 {9 B问题很多，见谅啊~~很是头疼，因为做了一次，没有明显的转染阳性的。。。。

jhu132llh

1.50%和70%效率上差不多，到那时50%的更方便一些，因为慢病毒表达比较慢，一般是转染后2-3天才筛选的，所以50%的要好一点的；8 f2 U6 r/ b, Y& I" ^
2.理论上，培养液含不含双抗和相应的生长因子对病毒是没有影响的；有的时候，慢病毒转染还是使用完全培养基的；/ @4 t( e, k/ |0 Y
3.一般在纯化慢病毒的时候就已经检测滴度了，所以一般是不用重新测滴度的，除非病毒在-80度冻存超过8个月，一旦冻存超过8个月，最好是重新做个滴度；
% @4 e$ |+ ~7 l0 A, l' P4.可以做个梯度MOI，所有人的MSCs都会有点差异的，所以条件不能完全通用，所以最好是做个MOI梯度摸索一下最佳条件；! v; C& L: B& d/ U4 o- a: d
5.polybrene是一种带正电的小分子，可以有效中和细胞表面携带的负电荷，有效提高转染效率至10倍左右，可以试一下不加和加，然后加8ug/ml和6ug/ml两个条件；

chentian820

就我最近的经验分开解答。
5 A# A% w, X* i1 293细胞密度在50-80%均可进行包装。包装效率最关键的还是包装细胞的种类和转染试剂，如果你的包装细胞用钙转不理想，建议你直接用lipo2000转；
! E* P  c7 U; x; d% ^, K# u; w2 我的培养基里面是加正常抗生素的1%。有的时候也不加抗生素。其实抗生素影响的主要是你的转染效率，而不是直接影响病毒的活性。/ b# f) R4 ^/ \% g8 `
3 不用测滴度。测的滴度也是相对滴度。仅作为参考。
0 q9 T, F' k0 Z) p5 k; \3 v0 g4 我使用的polybrene浓度是10， 感染后12h换液。

quge_00

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9 M2 G+ V2 J5 i% B+ n多谢解惑啊~~~

quge_00

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6 I* x9 y) u. B( V2 k# [2 o( J学习了啊~~