关于慢病毒转染人脐带间充质干细胞的问题。polybrene、MOI值

quge_00

最近在做慢病毒转染脐带间充质。有做过的，请教一下。$ ?+ ?1 w, ]) C& ^  B0 @( z2 G
1、包装细胞接种第二天融合达50%，文献有报道到70%再转染，50%效率是不是高些呢？/ ?! ~. J5 I& g
2、为什么要用无双抗的培养液配制病毒液呢？/ l" c5 r) x7 z- R8 ?, n, m
3、转染前用293细胞测滴度不？
& g. r# U% ~9 M: L; \+ a0 h4、文献报道MSC使用慢病毒转染MOI值比较高（10），并且同时还加入了polybrene（8ug/ml），请问您操作时加吗？还是自己梯度摸索呢？* [: t7 S1 {2 |% e8 h
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) |2 X) q! s; Q" D. N5 O2 `) S2 C问题很多，见谅啊~~很是头疼，因为做了一次，没有明显的转染阳性的。。。。

jhu132llh

1.50%和70%效率上差不多，到那时50%的更方便一些，因为慢病毒表达比较慢，一般是转染后2-3天才筛选的，所以50%的要好一点的；
( l7 ]8 U6 z. p( `7 T; u2.理论上，培养液含不含双抗和相应的生长因子对病毒是没有影响的；有的时候，慢病毒转染还是使用完全培养基的；
$ `* S& M/ d  p, l( w+ R3.一般在纯化慢病毒的时候就已经检测滴度了，所以一般是不用重新测滴度的，除非病毒在-80度冻存超过8个月，一旦冻存超过8个月，最好是重新做个滴度；
' @3 D4 {; Y) v' O( q4.可以做个梯度MOI，所有人的MSCs都会有点差异的，所以条件不能完全通用，所以最好是做个MOI梯度摸索一下最佳条件；
6 C) j/ J3 n0 G: O, E- s; m- d* b5.polybrene是一种带正电的小分子，可以有效中和细胞表面携带的负电荷，有效提高转染效率至10倍左右，可以试一下不加和加，然后加8ug/ml和6ug/ml两个条件；

chentian820

就我最近的经验分开解答。2 K4 x; F1 [/ e1 i, {
1 293细胞密度在50-80%均可进行包装。包装效率最关键的还是包装细胞的种类和转染试剂，如果你的包装细胞用钙转不理想，建议你直接用lipo2000转；0 s$ v, V- G4 b2 Y2 U
2 我的培养基里面是加正常抗生素的1%。有的时候也不加抗生素。其实抗生素影响的主要是你的转染效率，而不是直接影响病毒的活性。
/ |: h- I4 x$ M% p3 不用测滴度。测的滴度也是相对滴度。仅作为参考。# L8 Y% s3 A1 q; e7 |0 V& X* H
4 我使用的polybrene浓度是10， 感染后12h换液。

quge_00

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' V# T  v( K2 u/ a多谢解惑啊~~~

quge_00

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1 V, W9 f2 W4 @, R学习了啊~~