关于细胞周期时长检测

Sakya

各位大侠，如果我想检测某种组织细胞细胞周期G1，S，G2，M四个期以及整个细胞周期的时间长度，请问需要采用什么实验技术？

knowtumor

经典的方法是，H3-TDR一次性标记，定时连续取材。制备切片，放射自显影。计数被标记的有丝分裂像的百分数。连续作图便可计算出。
' F6 E  z/ r/ e! b# J7 @4 l" N/ x/ t/ W
FACS不能测。

Sakya

好弄吗？用核素标记核苷酸？

knowtumor

80年代和90年代初的时候H3-TDR还很多人用。现在恐怕没人用了，谁还卖？

Sakya

现在人们用什么方法检测细胞周期时长呢？？？

knowtumor

It is a lost art. 2 c5 }7 s1 [+ S3 ^" Q

Sakya

楼上能帮我设计一个简易的测定细胞周期时长的方法吗？

knowtumor

H3-Thymidine 可用BrdU取代。
2 F* S( `9 j) j% t5 z
5 y1 T9 V) y0 b比如小鼠肿瘤，一次性注射BrdU,间断取材。30 min, 1hr, 2h, 4h, 6hr,12 hr,24h, 48hr, 96h; 肿瘤的细胞周期偏长，一般在20-100hr。有超过100hr的。: t  |& h, ?5 N2 I, P

7 B- L0 P: G* T1 U) y) M将各标本制备石蜡切片，免疫组化做BrdU染色。计算Mitotic figure中BrdU的阳性率。做动态曲线图，可计算出。
3 Q5 w/ B8 L& c) o' u: m. R- j
0 d0 n. g! _9 O# h0 {) J& Q. r' S1 x

Sakya

thanks

Sakya

能不能把现在的流式细胞仪改进一下，让它可以测定细胞周期各期时间长度？