分离PBMC时的疑问？

gengtongyu521

分离PBMC时，有时会多吸取一些下方的分离液，以免细胞的浪费，这样，再离心时会不会不容易使单个核细胞离心下来，而悬浮在液体中呢？

Jonathan

不会。因为洗的时候用的是PBS，两个应该是可以互溶的。。3 }6 Z+ l1 k4 E( e3 Z3 f

HHvivian

如果有这种顾虑，PBS加多点。我也做过PBMC的分离，但未出现过单个核细胞离心不下来的情况。PBMC的分离还是比较容易的。

defu

操作基本过程如下：
& b' A8 C( E1 _$ e
! j& q4 k: a3 J- U, S0 H, Q$ }1、抗凝血约8ml，2h内收集，混匀充分；
$ y: f2 e, X7 F% F$ H0 [! ]! o
9 h8 _( A4 c3 R; _2、复温淋巴细胞分离液及1640；（室温自然复温2h或水浴锅中1-5min）
9 m- D1 ?4 |; H9 r2 i( a4 I; X" U6 c5 o* d) |% R5 N5 z' P
3、2支15ml离心管中各加入4ml淋巴细胞分离液，离心2min离下管壁上液体；
% j. y: |# |- i- i1 W7 X0 r' d, M8 i! r) F6 F+ ]9 G8 y
4、将8ml血吸至50ml离心管中，加入约8ml1640，混匀；
) d  f5 Y/ J- |, I2 B$ l8 @
' x) A0 O  C; X4 S) n- j" r5、使用BD产3ml一次性无菌塑料吸管，将混匀后的血慢慢加到淋巴细胞分离液上；" t" q0 M2 U/ M. K7 E) j, E; J3 s
+ f, B- D9 p2 i5 u! f
6、1600rpm（440g/min），30min离心；0 c# K; j0 S0 e) R
& s% @+ |2 M. f0 b- a, C- H
7、吸取上层血浆，用玻璃吸管吸取PBMC层至一新15ml离心管，加入1640至14ml，混匀；
; B" @% \- C0 J; [8 f) J9 F
; S/ i* [9 V- v3 B+ F8、1300rpm（290g/min），10min离心；' d7 T. d5 t8 z1 y: I6 a! I
% }2 H4 |' P& r/ @% F. v
9、同样方法再次洗涤。
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pengxuleo

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不会的，能不能离心下来要看缓存也的密度啊，你多加PBS洗，这样就稀释了分离液的密度，细胞就可以离心下来了

pengxuleo

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' G; U% N7 h7 C4 @, T* l( [7 Y( X2 o$ q6 t  u
不会的，能不能离心下来要看缓存也的密度啊，你多加PBS洗，这样就稀释了分离液的密度，细胞就可以离心下来了

pengxuleo

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不会的，能不能离心下来要看缓存也的密度啊，你多加PBS洗，这样就稀释了分离液的密度，细胞就可以离心下来了

easternliu

上面的人吹牛，我之前有遇到，细胞都跑到分离液当中了，所以吸了很多分离液，当时头脑发热没混匀，所以离心出现你说的现象，细胞没下来。所以吸了分离液一定要混匀，尽量不要吸太多分离液，如果没办法太多了，可以适当增加离心转速。关键是要混匀。。。

sunny.yc

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0 W5 z7 g: X8 w* W2 J
多吸一些没关系，只要别吸太多淋巴细胞分离液当中的”杂质“和下面的其他细胞就行了，然后用DPBS或1640混匀一下细胞，完全没有问题，我一直都是这么做的

pengxuleo

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/ U. G  Q9 h2 F" A5 w$ S% C0 l+ Z你说我吹牛也得好好看看内容啊，混不混匀是实验常识问题，没人会专门提出来