干细胞培养污染了吗

mayiwaiwai

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最近复苏的干细胞总是这个样子，速度慢，形态还不好，有泡泡的东西在边上，师兄说是不是支原体污染，不知什么原因？* [" [5 @  S: q% B0 T7 U' o
无饲养层培养的E14，冻存使用的是90%FBS+10%DMSO。难道是冻存过程中污染掉了吗？+ c3 T& h+ W, U& n- H/ U$ J% O
这样的细胞传代过程中，胰酶消化后不是单个细胞，会粘在一起，明显的一块，这是污染的表现吗？
% n3 K& w! W: x9 d% W% E细胞粘附性是降低的，用PBS洗的话就会脱落呢，( W7 z" [5 V" X
求指点。。。555

mayiwaiwai

9 B' u2 u: K: d9 y) r4 k# i" E4 P

luckywen

复苏细胞黏附抱团现象，细胞不好存活。可以试试用dispase2酶消化，使单个细胞分散开来再接种培养。这个酶相对胰蛋白酶和胶原酶比较温和，对细胞膜损伤小。一般情况下用培养基稀释即可终止反应。

wf78365421

没有污染。鉴定完毕。

XIE冬D

我刚开始养的小鼠ES也有这样的情况，大概就是细胞消化过度，及吹打造成机械损伤。我们实验室现在很少使用胰酶消化，除了做原代做feeder。

mayiwaiwai

回复 XIE冬D 的帖子3 P( d- i+ _0 C/ I) E

" ^# T% s" ?$ H8 @0 O9 n这是冻存的细胞出现这样，之前的没有这种情况，虽然也会抱团，但是长出来的形态还是好的，基本2天就要传代的，现在长的好慢，基本要3-4天的样子，做sphere的分化也不好，基本长不出来，就想知道我的细胞肿么啦。。。。。

mayiwaiwai

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附一张冻存之前的ES，冻存后复苏怎么就不行了呢

mayiwaiwai

回复 XIE冬D 的帖子$ C. @. |) m2 R* }: {

8 ]5 n: Y( q; d' I) s; i0 }3 z还没有传过代，难道是冻存的时候消化过度，或者你说的吹打过度，

cqstemcell

个人觉得有可能是消化过度造成的。

sszxlijin

跟楼主养的一样的细胞E14 无滋养层 明胶包被的 最近老分化。看楼主养的挺好，想问问楼主点经验。谢谢