关于间充质干细胞实验技术问题~

liaoyanstudy

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我猜测是酶浓度过高，消化时间太长，和培养瓶太大导致的~但是到了这个地步了，想问下，能有什么办法挽回吗？~
% F4 D5 r! O. e2 A谢谢~

gghywtfz

liaoyanstudy 发表于 2013-6-18 12:31
  c6 K3 g: t$ R4 O, l) b$ E回复 三月桂花香 的帖子: d, \% h9 f3 E# |* y
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我猜测是酶浓度过高，消化时间太长，和培养瓶太大导致的~但是到了这个地步了，想问 ...

$ X4 h( m/ U+ C, Y  r; s
老化了就不能再挽回啦。
& Z, a; d6 ~4 ?6 h: R原代14天是极限了，长不满也得1：1的比例传代，养到18天细胞都不好了

yinfuhua

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, C" b: g7 w# E! A4 T9 F
1 w6 {, }) ^1 s" c5 p, ?) I" y$ u知道大概情况了。看照片，一部分细胞状态还好。还像是胰酶消化时间掌控问题（不要过长）。另外，培养时间也不要太长，细胞老化后，再消化也会出现这样的问题。

fengxiwu

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. h6 |7 w, ]2 C- X$ s4 E
+ F! s: }4 L# {% l我先前也是养过白血病人的MSC，取材骨髓。培养后发现，一是：相对正常人骨髓来源MSC，其培养时间要长；二是：培养出的MSC形态多样，很多奇形怪状的，老化是另一方面（未有仔细观察，是否易老化？）；三是MSC扎堆的现象少，而正常人骨髓MSC有扎堆贴壁现象，不知是否其他培养过MSC的战友们有这样的感觉；四是：白血病人的骨髓分离出的单个核细胞数量通常量很大（初发或复发、非治疗中），因此我的实验中初始接种密度也大，其贴壁MSC相对数量也多，不知其相对比例是否也高（实验中初始密度不统一，也未做仔细比较）。4 x$ ^: G4 m  M# t7 S
    有肿瘤方面的书或间充质干细胞专著中也可以找到些相关问题。图书馆很有用的，同网络比较，信息获取有其优势：方便，信息量大、全。
. m% Q1 Y& v) c' e- u    谢谢！

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子' G' [; J% E8 J0 T# y

$ \  a; z0 s- F恩~好勒，方便留下联系方式么~向你请教，相互学习~！谢谢~

liaoyanstudy

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" k6 ?/ @5 C4 v恩～，好的～我再试一试～但是想把这些拯救下，不知道有什么方法～

yinfuhua

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正常消化下来，按照传代过程操作。根据细胞数量可以1传1或1传2就可以了。但培养时间不要超过5-6天，中间视细胞生长情况换一次液。你再看下细胞状态如何。

sdyinong

培养时接种所用的细胞浓度是多少，细胞长18天才铺满本身就是很慢的了，是不是接种的密度太少了？再就是培养基可以换成alpa-MEM培养基试一试

liaoyanstudy

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  L1 i" v+ y1 g+ A! H/ `2 h我今天已经消化下来了，按照以往的老化经验，消化重贴后还是老化的那种状态~

yinfuhua

回复 liaoyanstudy 的帖子8 m5 ]& w( L# n, c

# }+ @1 `  ?3 Z2 [3 V! W间隔1-2天换液看下吧。