关于间充质干细胞实验技术问题~

liaoyanstudy

大家好，最近我养了一些临床来源的MSC，然后发现老化的比较严重，这个才是第一代，就有点老化的迹象。想问下是什么原因导致的？目前我分析2个原因：1：我在消化的过程中，酶的量比较多，50ml的培养瓶，我一般用了5~6滴的酶消化。2：是不是我种原代的时候，细胞比较少，然后我用的培养瓶比较大，然后导致长满50ml的培养瓶需要很长时间，从而导致老化或者分化。最后我想问下，有没有什么方法可以阻止这种情况发生》？谢谢~~

liaoyanstudy

这个是图片

liaoyanstudy

这个是稍微低倍的图片

liaoyanstudy

希望有懂的请给予回复谢谢~~毕竟大家都是为干细胞的研究事业共同奋斗~~

fengxiwu

回复 liaoyanstudy 的帖子$ O5 i6 h1 I# d+ I/ J2 ]

; x0 d" r, g3 d0 T( W* R: H你讲的不够详细，你用的什么培养基？血清是哪一种，厂家。。。？
7 t3 ^  Z4 k7 R" a6 P% M; @/ X临床来源，是正常人还是病人，什么组织?怎么取材的，消化时间多长。。。？
  ?1 J6 B5 |2 M7 M/ C培养了多长时间长成这样，有没有先前培养时间短的自身对照，你总共多少样本，一些是多少？4 L& ^# t* p+ A' j; J7 i/ X
越详细了，别人看了才更明白，才能有的放矢。或许你自己就能慢慢找到原因。

yinfuhua

回复 liaoyanstudy 的帖子
- h3 [  |0 H( b& Z8 @3 S2 U7 U8 m  x1 [) {3 s) R  q
1、这张照片是培养几天的？8 M0 ^) A8 e; i5 K* W* d
2、消化用的什么酶？浓度是多少？5-6滴酶是多少ml？
: u8 w* P' o$ v3 W$ Q6 B3、培养液是什么品牌？是无血清培养基还是用的XX血清？5 Y" u6 F6 L5 @/ @
4、长满50ml培养瓶的具体时间？（很长是几天？）
" Y: m' O" d3 }: [4 k! [, p了解这些才又助于分析原因的。别着急。谢谢！

三月桂花香

主要看你酶的浓度，消化时间，培养天数，种植密度等等去考虑。

liaoyanstudy

回复 yinfuhua 的帖子0 U% g4 o. r4 ^
5 }- r) W. Y0 d5 Y/ o& E! Y5 h1 M
1：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片；
$ Z& w. {  L  g$ _2：消化用的是常用的胰酶，浓度应该是0.25%，5~6滴大概0.5ml吧~5 r' m/ c! F9 c5 D
3：培养液用的是DMEMF12,是含有10%进口胎牛血清5 T2 C' `! z4 |1 c
4：长满50ml培养瓶花了18天。6 [; L  v' N  N9 s
谢谢~

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子' g8 H  G' q/ a4 ^2 m' g
. ?6 D* {# R! w
1：临床来源白血病患者，但是文献查找没有说白血病患者MSC原代容易老化；
5 g) r: G+ a( ?4 b+ L2：培养基用的是DMEMF12，含有10%进口胎牛血清
+ W$ T2 _0 o! Z3：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片，也就是说一共养了20天的照片，传第一代后的第二天  l5 s7 J3 A* K+ R# I
4：之前师姐养的是正常人的，她那个不会这么老。目前考虑是我的操作方面有些不熟练的问题导致的。

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子, w: z; Q$ V  U5 J
5 t! ^  U% N' \( }( a' F
谢谢~