关于间充质干细胞实验技术问题~

lele

回复 liaoyanstudy 的帖子# ?8 f+ g' W2 U: I5 L  I/ y, H- u' [; u

+ t- H/ E6 j) \, `( `/ n4 @0 `培养基没有问题；6 M6 Z: d+ m0 n; p3 \
原代培养18天细胞铺满，时间也不算太长；
  \: @# J+ K4 A$ Q; {. K$ U* u+ U9 D有几个问题问一下：6 @- f/ A8 ?" J/ }" ^
1. 胰酶消化时间有多长，镜下观察细胞在什么状态下终止消化的呢？（比如说百分之多少细胞变圆或漂浮起来）？
' w$ M% _5 Y. j0 V2. 患者性别和年龄是多少；
: }  ]9 s5 }" y3. 传代细胞的比例或接种密度是多少？
% Q4 V1 s& u0 d& V9 y; E* z( K9 j4. 原代细胞的接种密度是多少？什么方法获取的MSC？! a+ |: M( A/ Q) ~/ l

deshenglll

回复 liaoyanstudy 的帖子5 l5 _& L3 D3 w: p2 o5 y

$ `' f  J6 {$ C; N" f# C7 y( R你提问的方式不是太清楚啊。你这厡代培养了几天？传代时细胞接种密度多少？还有就是胰酶浓度及消化时间是多少？这也是为了我们能给你更好的解决问题。

星火燎原3562

我的细胞也是这样，用的是DMEM培养基+TBD血清，血清没有你的好，很是纠结，准备换hyclone血清，不知道你用的是什么血清

wind789

4 m, w% T. g3 y) Z2 B6 q9 c7 d9 \1 r
( L( `: e5 e$ W' S; [回复 liaoyanstudy 的帖子
* a1 {6 {2 v- E/ B$ g- O) u0 }) p% n# o
是骨髓MSC？第一代长满的照片有不？

bonny

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8 g) d7 z8 z, G+ X3 F4 y2 x
/ m8 a1 d! V6 ?8 P. f原代先用小的来养吧，可能本身取材的量就少，细胞太少本身就影响增值。主要是消化的时间，量没有问题。原代长到50%-60%就可以传了，有些人喜欢80%，不过原代我喜欢不那么满。长满会有接触老化的问题

liaoyanstudy

回复 bonny 的帖子3 m- P4 b, d. K9 Y0 E; q& B

9 Z. ^5 B+ F# J4 q. U恩~不过很多文献都是说长满80%才传代。那接触老化的问题是不是真的存在？？~

spring1221

回复 liaoyanstudy 的帖子, W0 |) U5 }' N: {2 }

: R7 j7 c6 w7 P; d5 v想问一下楼主，原代长到18天的时候状态怎么样呢。胰酶消化是个经验问题，注意结合镜下观察就好了。我觉得主要问题在于，原代的换液时间，一般情况下，营养不足是细胞老化的直接原因，当然你原代密度太小会影响。老化是不能逆转的了，做个检测看看表达情况来确定能不能用吧

tonyww723

酶的问题不大，不过时间不宜过久，如果是组织的话 不要超过30分钟到1个小时，孵箱内，需要加血清终止反应。  `8 n+ V$ Q& E% H
不过看你的这个图，估计接种密度太低了，原代细胞如果量不大的话，最好放在培养皿养，标准的作法是看到克隆后，用tips挑出来，然后放在孔板里养，正常传代密度不要低于3000/CM2

liaoyanstudy

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. t5 I; b" w. V& U2 }! ]3 V
& `1 i3 w% V3 D你好，目前干细胞遇到些问题想咨询你，这样的，由于实验室问题，更换了另外一个实验室人，然后新的培养箱CO2变化特别快，干细胞在传代之前，长得还算正常，但是我一传代，就不行了，老化特别严重，酶的问题我已经排除了，想问下C02对干细胞老化是不是有促进作用??谢谢~

liaoyanstudy

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/ \$ R: Q* i8 `! M1 z8 O
; X; _& q0 ~. l1 M$ s& e0 u2 I恩~好的~我再看看~谢谢~