肿瘤干细胞消化和流式检测如何保持细胞活性

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无血清培养的悬浮肿瘤干细胞，能看到细胞的扩增。细胞照片如图：/ l# a6 R2 ^9 g& t! [. R& `

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) P) K4 ]8 h0 C4 C1 w/ x& X8 b' h6 Q
但是用台盼蓝染色计数时，不管是否用胰酶消化处理过，镜下完全是一片蓝色，细胞数量没办法计算。上机做流式，细胞状态也都不好。( v' @! H0 B! P6 T& Y

3 a; _, L, M+ y1 T请教大神两个问题，
5 r: W6 c. T9 K7 A1. 悬浮的细胞球怎么能消化成为单个细胞？. C4 u6 |+ ]2 o# C. I, O
2. 悬浮培养细胞状态是否都不是很好，像我遇到的问题，应该如何解决呢？
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wuzhouying2132

我觉得你的细胞已经都死掉了，或者已经开始死掉了，因为(用台盼蓝染色计数时，不管是否用胰酶消化处理过，镜下完全是一片蓝色)。( s3 G% w! P6 Q+ p2 d" A
悬浮培养可以很好，只是不知道你的问题出在哪里？我做的细胞球只是用tip轻轻吹打就可以开，但如果要做facs的话，会在加完抗体之后用filter过滤一下

412159616

回复 wuzhouying2132 的帖子7 T* I; b$ B/ k+ |0 J+ l; W

2 Z9 B, B/ F0 o9 T, k2 W可是细胞的扩增速度都还是不错的，这又是为什么呢？

yuanshenyewu

用小皿，直接镜下计数，应该也可以数的清啊% G' j' q9 l% m. Z$ j5 d. l$ N
？或者CCK-8看他的增值能力？

luyue6453

回复 412159616 的帖子' L& r' p  A' v7 r4 d

2 A, M+ d$ p( ^: U正常悬浮的细胞球，你摇晃几下就会分开，过一段时间有聚集，你要不要弄散了后就加快速度做后续试验？再者看您的细胞长的也不是很好，尤其那个黑团感觉都要死掉了，你确定增殖速度快的细胞是你要的细胞吗？

412159616

回复 luyue6453 的帖子6 h5 H; A0 L+ L9 V$ v% D

! t2 ?# G3 a/ J6 C% X" @# y7 @是养一段时间，出现聚团就用胰酶消化继续养的意思吗？

luyue6453

回复 412159616 的帖子: c9 Q0 c2 s2 y2 ?

0 \" S5 i6 i3 P/ z不是那个意思，总体感觉你的细胞很不正常，悬浮细胞只要聚集在一起你摇晃几下会自动分开，不需要胰酶的，

412159616

回复 luyue6453 的帖子. q# i" }5 ?1 ]( m+ D4 S& u
+ h# y% X- T9 _5 E- J4 c. h3 F- [! A
这样子，是不是干细胞培养，初始的细胞密度最好在50000/mL以下会比较好？我还看到有建议5000以下的。

linhua188

我觉得你的细胞都死了，黑黑的，而且边缘已经破碎，还有你的细胞培养基里面污染严重！！细胞碎片很多~~细胞计数的话，多吹吹用点胰酶就好了
/ _7 M$ z! a6 i) c6 Y% }+ K* E- z还有不知道你怎么看细胞增值的，其实成球状态下细胞增值的不明显的
! V$ s! S/ }8 [; u8 O

冷释

回复 412159616 的帖子* f# G9 P% l( C! \. h% l6 x' w

3 [, o/ O5 H$ X$ @; d: q你养的是悬浮球细胞吗？建议试一下invetrogen  StemPro® Accutase® Cell Dissociation Reagent 100 ml，我用的货号是A1110501。我用着效果不错，就是有点贵了，100ml 800多。我之前也用过普通的胰酶，打不成细胞悬液，多吹打几次，细胞就拉丝一样的，细胞传了一次就不活了，后来找到这个分离液。