求明胶包被培养瓶的流程步骤

pydsn88

如题  课题组没人做过 ~~包括明胶该怎么灭菌 我觉得这个好麻烦啊 主要是不好过滤

星光灿烂

这个我觉得自己做的话会很麻烦，而且每批的质量不能保证，鼠尾胶原和明胶都有成品买，也不是很贵呀

shihuijunm

回复 星光灿烂 的帖子* X3 w( o5 F2 }

3 R7 @) v2 T7 F2 g2 J9 j我们实验室用的是这个，你可以买
7 G- |! n9 V  I$ R1 [) H0 zgelatin form bovine skin (Type B powder bioReagent) ) V$ O5 c" A" y1 k, |4 x3 j7 e
suitable for cell culture - P+ d. V0 R; m+ N2 \1 B
sigma G9391-500G
+ y6 \& l" R- V; i' N1 P4 Y8 xCAS 9000-70-8
. a% u# ~2 P2 H' T4 l% E# @用的时候用去离子水配成0.1%浓度，高压灭菌后就可以直接用了，用的时候放在37度培养箱跟培养皿作用30min，或者包被过夜都可以。

xiaolizhang87

回复 pydsn88 的帖子
' R" p$ B) F9 i- G2 ^* m3 W" n2 L# L
我们的做法是：sigma明胶粉末用DPBS溶解，于121℃，灭菌30min后，于-20度长期保存。包被之前提前一天4度过夜融化，用之前平衡至室温，随后用于包被（37度，1h；或4度过夜）。最好现用现包，不要包被好之后放置时间过长，会影响效果。

embryonic12

请问包被过程的具体操作，把胶放进培养皿就行了么？

星光灿烂

我觉得你是对包被这个概念不太了解，其实很简单，就是把你已经处理（灭菌、稀释等等）好的明胶溶液加到你要包的培养皿中，以能够覆盖培养皿底部为准，哦，要稍稍多一点，不要为了节省就加的量比较少，否则放置一会还会出现覆盖不满的状况。加好之后放于37度，1小时或者4度过夜都可以，这样明胶会均匀贴到培养皿的底部，用之前用基础的培养基洗一遍或两遍就可以了。

pydsn88

回复 shihuijunm 的帖子* q; n+ C1 s7 m2 m) a6 D

  p: K$ {* A$ i非常感谢 我买的跟你们一样的 还想问一下，高压灭菌完了 你们还用0.22um的滤膜过滤么

pydsn88

回复 星光灿烂 的帖子
( h; T( y$ ~: v; G8 Z" t0 Y* k( L! B
非常感谢 这些经验真的很重要

pydsn88

回复 embryonic12 的帖子
0 h$ U) Q* X: Q5 V" Q" t$ a0 U8 h* b5 s& u. v2 c; |- g5 R  A8 ]# v
应该是把胶放进培养瓶 孵育过夜之后 再冲洗掉 要的是站在瓶子壁上的

pydsn88

回复 星光灿烂 的帖子1 C4 O: S1 N' l' i% ^2 U

5 ?. \6 I9 q* i8 ]; E1 T7 y您是说 无菌液体包装的那种么  我就觉得好遗憾 我定试剂那会赶着圣诞节只有国外有货说得等个半个月才到 一心急 买的sigma的无菌粉剂 还要自己配 无菌操作最犯难了