求明胶包被培养瓶的流程步骤

pydsn88

如题  课题组没人做过 ~~包括明胶该怎么灭菌 我觉得这个好麻烦啊 主要是不好过滤

星光灿烂

这个我觉得自己做的话会很麻烦，而且每批的质量不能保证，鼠尾胶原和明胶都有成品买，也不是很贵呀

shihuijunm

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9 g! Q: G0 c. d/ y4 ^" A3 x, z$ q+ \: E5 B2 K! b
我们实验室用的是这个，你可以买5 ^7 ?4 o- ~9 Q  i5 `7 e/ v
gelatin form bovine skin (Type B powder bioReagent) # w* s# Y3 p* Y* ]
suitable for cell culture " s( M# ~& S5 o2 h1 k- ]) Q# S
sigma G9391-500G
! e+ a2 Z, p0 I: ECAS 9000-70-8. K# @. X; ]. I7 e! ]# k8 x
用的时候用去离子水配成0.1%浓度，高压灭菌后就可以直接用了，用的时候放在37度培养箱跟培养皿作用30min，或者包被过夜都可以。

xiaolizhang87

回复 pydsn88 的帖子& i+ m  q+ W5 k0 \# o* J

# m# `+ w8 d6 B. e# h, i我们的做法是：sigma明胶粉末用DPBS溶解，于121℃，灭菌30min后，于-20度长期保存。包被之前提前一天4度过夜融化，用之前平衡至室温，随后用于包被（37度，1h；或4度过夜）。最好现用现包，不要包被好之后放置时间过长，会影响效果。

embryonic12

请问包被过程的具体操作，把胶放进培养皿就行了么？

星光灿烂

我觉得你是对包被这个概念不太了解，其实很简单，就是把你已经处理（灭菌、稀释等等）好的明胶溶液加到你要包的培养皿中，以能够覆盖培养皿底部为准，哦，要稍稍多一点，不要为了节省就加的量比较少，否则放置一会还会出现覆盖不满的状况。加好之后放于37度，1小时或者4度过夜都可以，这样明胶会均匀贴到培养皿的底部，用之前用基础的培养基洗一遍或两遍就可以了。

pydsn88

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, e; N/ J4 C3 T. U1 T; G6 r' m! h. r( T
非常感谢 我买的跟你们一样的 还想问一下，高压灭菌完了 你们还用0.22um的滤膜过滤么

pydsn88

回复 星光灿烂 的帖子6 r0 T; Z; G1 }6 z) ~$ u* R7 i* |

0 n! S8 U+ j6 M, c; {4 e非常感谢 这些经验真的很重要

pydsn88

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应该是把胶放进培养瓶 孵育过夜之后 再冲洗掉 要的是站在瓶子壁上的

pydsn88

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/ _' c3 u$ I8 [9 k, J' ^% ]3 @- D3 B
9 A% C, B. l6 X+ E您是说 无菌液体包装的那种么  我就觉得好遗憾 我定试剂那会赶着圣诞节只有国外有货说得等个半个月才到 一心急 买的sigma的无菌粉剂 还要自己配 无菌操作最犯难了