求明胶包被培养瓶的流程步骤

pydsn88

如题  课题组没人做过 ~~包括明胶该怎么灭菌 我觉得这个好麻烦啊 主要是不好过滤

星光灿烂

这个我觉得自己做的话会很麻烦，而且每批的质量不能保证，鼠尾胶原和明胶都有成品买，也不是很贵呀

shihuijunm

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- F  d. S4 `& I3 W, a; U2 T' @$ K
8 i, r9 o6 Z2 M/ b' q' S我们实验室用的是这个，你可以买) e' H$ l/ ]. d8 s  V8 A6 @! u
gelatin form bovine skin (Type B powder bioReagent)
# o6 _9 g. x7 P- [* O8 Q6 p! ysuitable for cell culture
- _  J6 X1 k9 F9 u' H/ _3 lsigma G9391-500G - ~5 b8 l9 k. I. f! d
CAS 9000-70-8
; X; Q: w3 t* H; G- c2 K. @用的时候用去离子水配成0.1%浓度，高压灭菌后就可以直接用了，用的时候放在37度培养箱跟培养皿作用30min，或者包被过夜都可以。

xiaolizhang87

回复 pydsn88 的帖子- U+ x! ^# o' b5 m
, e5 m$ {1 G3 R* }1 ?/ [
我们的做法是：sigma明胶粉末用DPBS溶解，于121℃，灭菌30min后，于-20度长期保存。包被之前提前一天4度过夜融化，用之前平衡至室温，随后用于包被（37度，1h；或4度过夜）。最好现用现包，不要包被好之后放置时间过长，会影响效果。

embryonic12

请问包被过程的具体操作，把胶放进培养皿就行了么？

星光灿烂

我觉得你是对包被这个概念不太了解，其实很简单，就是把你已经处理（灭菌、稀释等等）好的明胶溶液加到你要包的培养皿中，以能够覆盖培养皿底部为准，哦，要稍稍多一点，不要为了节省就加的量比较少，否则放置一会还会出现覆盖不满的状况。加好之后放于37度，1小时或者4度过夜都可以，这样明胶会均匀贴到培养皿的底部，用之前用基础的培养基洗一遍或两遍就可以了。

pydsn88

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非常感谢 我买的跟你们一样的 还想问一下，高压灭菌完了 你们还用0.22um的滤膜过滤么

pydsn88

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6 Z) N8 a8 y1 O* E& `' N; n3 P  Y* g( a* ^  a
非常感谢 这些经验真的很重要

pydsn88

回复 embryonic12 的帖子
: P3 `+ {1 K$ q( b' o7 ^5 t' M& a
1 k  e4 U3 a9 _1 z应该是把胶放进培养瓶 孵育过夜之后 再冲洗掉 要的是站在瓶子壁上的

pydsn88

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. o: g4 L. D9 K, k( q9 i, C3 L" T' e4 F; B8 v
您是说 无菌液体包装的那种么  我就觉得好遗憾 我定试剂那会赶着圣诞节只有国外有货说得等个半个月才到 一心急 买的sigma的无菌粉剂 还要自己配 无菌操作最犯难了