培养脐带干细胞没有成功，恳请各位老师指教，谢谢您！！

屋檐上的乌鸦

我觉得你这个放置12小时时间有点长了。建议最好是取完脐带后，在最短时间内接种到培养瓶内

frankhu

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首先在你第一次换液时，应该有很多细胞已近爬出来了，所以部分组织块被洗掉是不影响实验的。如果细胞状态好，隔天颜色就会变化，如果颜色没有什么变化，那就继续观察。

cloud100

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' R) m8 S: [2 |# O% s" z7 f) A嗯，手术室离我们实验室进，我一般其实1-2个小时就开始做了，就是还没有结果。。。不知道到底哪里错了。。

cloud100

回复 frankhu 的帖子3 e0 t( ], _% m7 J# k

( K" C3 m  [: o4 i我第一次换液就观察了，没有看到细胞，以前组织块很大，会有大部分冲洗掉，现在小组织块都没有掉，贴的很紧，，但就是接着培养液颜色不变了。都不知道怎么改正。是组织块太小了吗？

1360501260

有两个重要问题，第一，培养液血清浓度过低，15%比较好，第二，她翻转时间过长了，10小时-18小时没有培养液，肉块都干透了
% x5 N" n# K: }1 S; X! Y& Y  ~

frankhu

回复 cloud100 的帖子% J+ H  d; f8 f' B0 H* N% k! j
3 Z4 K% ~. C. O( G+ Y; u
剪成米粒大小，然后均匀排列在瓶底，加少量培养基浸润组织，培养4小时后再补加培养基完全浸没组织，4天左右可以在显微镜下看到组织周围块有爬出来的细胞。每次换液确实会有部分组织丢失，可以不用理会。

cloud100

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' k7 k) ]. M2 N# w2 u+ M: f' d( U9 q. @9 Z
好的，谢谢您的指导！下一次培养我注意这个问题。

cloud100

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7 z* b; G0 x  l& o
; g7 S2 c8 Y5 O+ k8 y/ T好的，谢谢您的指导！下次我试一试你这个方法。

cyagen

楼主用的是gibco的干细胞专用血清吗，一般我们作实验血清都需要筛选，这个对细胞的生长状态影响还是蛮大的

cloud100

回复 cyagen 的帖子/ A- a& c, r' I# X; E

1 C" J% ?) L* I% a不是的，因为第一次养细胞，当时没有想那么多，应该是用专用干细胞血清会好些，我买的就是普通的FBS。现在换血清太贵，换不起呀。。。