CIK细胞培养一周死亡

sdzhxq

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5 u4 s8 Y9 L' l! L细胞没拍下来，新手刚做，一共做了3次，都是这样。能够分享您的经验？

lyj-0017

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" Z5 a0 L; R4 u  ?) _. ~( c* B- L, `' k/ Q& r5 Z1 Z! J/ H
密度的问题论坛里都有，大家都是建议密度高一点会更好，你可以调到2试试，但相应的D1天可能会出现聚集现象更明显。细胞后期扩增过程中出现细胞集落是良好的生长过程。培养基一般都是商品化的，里面应该都是添加谷氨酰胺的。

hefan1234

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3 M# N: A9 `3 Z7 Q
1 b, v- O3 Y8 r8 Z1 a- Z接种浓度有点低，你采血量多少，得到单个核多少，培养基中是否加自体血清了?

我是丁香

我们的经验，不管密度是多少，细胞都不至于会大量的死，最多是增殖差。“死”的含义是什么？溶解消失了？还是状态不好？

sdzhxq

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2 Q/ k# v  ~6 @# l7 K+ N
9 ~7 g9 ]* F) }2 n1 E我是用脐血培养的，50ml血，提取大约5x107个细胞，培养基加了50ml，没加自体血清，加上自体血清效果会好吗？血清怎么获取，里面含有抗凝剂呀？我们用的采血袋，里面抗凝剂是枸橼酸钠

sdzhxq

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; k3 t  X" M, w6 f" r增殖差，台盼蓝染色有很多死细胞，显微镜下看细胞感觉细胞不完整

hefan1234

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7 {9 e0 A3 m) K3 }. H8 e1 w. Z) f% A0 ~, w" a
脐血培养CIK也做过，但没有出现过一周就死亡的现象。血清获得方法是将脐血2800rpm，10min离心，获得的上清56度水浴灭活，1500rpm，10min离心后取上清。我们实验室用的抗凝剂是肝素钠。

fenlichong

4 W$ K7 q8 F1 p: J& A6 N8 D
! A- t( F% `# Z' i1 k最好附上照片，以确定形态是否正常，有无污染等。你收获的PBMC细胞纯度如何，是否高于90%？接种密度一般1-2×106个/ml就可以，扩瓶的话试试每两天扩一次。添加因子一般还有IFN-γ，培养原理及添加因子可参考此帖http://www.stemcell8.cn/thread-70676-1-1.html。不知按照你添加的因子及培养方式操作的话，你们实验室其他人员有没有出现类似问题？

fenlichong

最好附上照片，以确定形态是否正常，有无污染等。你收获的PBMC细胞纯度如何，是否高于90%？接种密度一般1-2×106个/ml就可以，扩瓶的话试试每两天扩一次。添加因子一般还有IFN-γ，培养原理及添加因子可参考此帖http://www.stemcell8.cn/thread-70676-1-1.html。不知按照你添加的因子及培养方式操作的话，你们实验室其他人员有没有出现类似问题？

heirrii

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1 x) [% S+ S- j& ~3 |8 y3 i) E! Z6 n2 l) z) F: \8 b
我们也是用的枸橼酸抗凝。你分单个核用ficoll吗，有没有洗涤干净。得到的细胞加入50ml培养基有点稀。