实验室细胞增殖慢，死的厉害

zkfootball

大家好，我们实验室的细胞感觉增值不起来。) J9 }- ]* ?- t# n
1：293T原来2-3天传一次代，但是现在4天都没有达到可以传代的密度。
/ ]6 m" p/ S& j/ s0 H2：养滋养层细胞（用于支持人的胚胎干细胞），如果是未用丝裂霉素处理过的，第一天贴下去还挺好，但是第2-3天就开始死的厉害。如果丝裂霉素处理过，在hESC培液里长得很好，在原先滋养层细胞培养基里（DMEM+10%FBS）就会死的厉害。7 U. D, C# r% D" }! D7 b. u
3：已经检测过支原体，发现没有污染。也换过DMEM,FBS，也没有改善。
# E9 D' K7 E- I& m' b/ J2 W- v4 y: w- u1 m现在都不敢养细胞了，请大家提一些可能的原因。谢谢！

奇幻雪蓝

死的厉害是什么样子的现象？怎么死的？死的时候细胞是什么样子的？有没有变长或变大/变黑？培养基的颜色有没有变化或者PH值变化大不？

yuanyecat

细胞死亡的原因，5 s# x3 x  L0 R
1.真菌或者细菌污染。你除了支原体，细菌和真菌你检查了吗？, j$ [5 M2 C/ W
2，培养箱的问题，你检查了你们实验室的培养箱，温度，湿度，二氧化碳浓度都正常吗？不要看指示表，你这种情况是不是培养箱感应器有问题，要自己亲自测量一下。% N6 O/ j/ g3 }' l7 B. X4 H( j; Z
3，滋养层细胞有问题，你检查了滋养细胞了吗？比如污染等

zkfootball

$ ?; G% F8 L, ?) e: x( ]6 g" Q# r& `' r. Y8 k. ?( l7 z- L
回复 奇幻雪蓝 的帖子
$ h' D7 k0 u( ~' [  `% _1 [2 X# V$ o+ I: N7 C1 Y9 L8 |3 n! b

2015-1-29 15:11 上传

下载附件 (586.18 KB)
铺下去第一天的滋养层细胞

% \; x# H, V6 E) i铺下去后第一天观察滋养层细胞. {( \# O0 ]2 y! |
' G: V5 U; k4 \  P. a

2015-1-29 15:12 上传

下载附件 (600.23 KB)
铺下去第三天的滋养层细胞

# U! \: a6 U, e: i) M; m
铺下去后第三天观察滋养层细胞

zkfootball

回复 yuanyecat 的帖子
8 w" ~( a. _# c" z! d! _2 B
; O% S& ]* `7 k# N3 g3 V1 G; N+ _1 P  L+ [1：真菌或者细菌感染应该可以肉眼看出来吧？我这个确实看不出来。
( p) M+ |1 s% |8 R" f. x2 `2：二氧化碳浓度测试过，没问题。我准备再去测测温度和湿度。6 ?8 T; _! M# ~: e2 ]
3：这批细胞原来用都没有问题的，测了支原体，也是阴性的。

zarecol

细胞老化,还有可能是细胞营养不良，检查你的细胞来源和培养液中营养成分是不是有质量不过关的。

zkfootball

回复 zarecol 的帖子
. M# Z' W. _4 Q
" @5 o5 Q* P  G; z/ \# J好的，多谢！

宋红卫song

回复 zkfootball 的帖子
7 Q3 s) F/ A$ P) ^5 B9 Q5 X+ u, }' G" g# C& e# l( [  m
你饲养层细胞的制作过程是怎样的？如果是之前丝裂霉素处理后立即冻存，若丝裂霉素处理力度过大，刚复苏时饲养层细胞还是可以长得很好的，但过一两天就会死。可能是丝裂霉素处理力度过大吧。你说进行了支原体检测，用的什么方法，可靠吗？

dahui

回复 zkfootball 的帖子% T1 u3 R; y1 N2 T

9 d2 L+ T  p" l. i用的哪的血清，真心话，现在仿货太多，请留意。

gd541767393

* d( M' o& m7 @, K. w) w% Q8 a. t+ o9 U9 z" ?/ r
细胞如果以前用没问题，现在出问题，，跟细胞本身没有关系，是不是这一批次培养基缺少某种成分，或者说血清有问题，感觉像是营养不足，或者可以测下内毒素，和病毒是否感染