用什么牌子的淋巴分离液分离脐血单个核细胞？

小梓莜

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: x0 L8 Y; A) J6 M. |* l0 a# n  k" t+ _+ y1 R# d3 s) R* J
想问下你那边脐带血一般放置多久进行分离？分离的效果如何，单个核细胞数目多少？谢谢参与讨论~

hk456

我们用的是天津浩洋的 效果不错  

小梓莜

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: Q$ V- m0 M+ \$ D/ x# y7 U
5 M- G9 r. ]: Y" }2 Y: o  B. p谢谢回复~~

lt595370417

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) g/ R$ p9 m1 u5 L6 _5 r
$ C& k6 B$ v! M8 W% ~我们都是用20ml的分离液加上25ml稀释过的血液分离，你这个是不是比例有点问题......而且脐血时间放的确实有点长

chenlin080102

分不出来的原因很简单，并不是分离液不好的原因，而是脐血跟外周血存在本质的区别，我之前也是做不出来，现在优化工艺后已经解决这个问题了，因为脐血里面含有大量未成熟红细胞，这部分红细胞密度很小，所以正常方法是离心离不下去的

Ivan0108

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& a9 X7 f; h! M! `! f
1、存放时间久的血液，分离效果比较差。而且后期细胞培养难度也比较大，主要是增殖少。* T: C5 S1 `4 s7 c: a$ D
2、一般都使用天津灏洋的就可以了，实验级就可以，不会检测内毒素超标的情况。
: I* w! d- E% }8 Z$ ~6 m& A' V3、分离效果也与血液有关，有些人血液血脂比较高，分离时效果也会不好，而且会掺杂许多红细胞。5 {$ |/ P- O5 N/ i1 ~( z
4、如果要得到比较纯的PBMC，可以参考先采用羟乙基淀粉沉降红细胞再上淋巴分离液，这样效果很好。就是得率可能稍微低一点。

chenguangyu

天津TBD

小梓莜

回复 chenlin080102 的帖子$ ]0 X6 k; Z) r$ N) d

9 j7 g5 l7 {; X2 `5 F- s; s/ L您好！我目前离心效果好了点，留在白膜层中的红细胞减少了很多，剩下部分会再用红细胞裂解液裂解，不知您那边是如何优化的呢？改变离心转速？还是延长离心时间？谢谢您的指教。

chenlin080102

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% Y* ~. F$ x- _; _  W5 m, D  q' s8 O" l& y& \* }9 r
其实要从根本找原因，最重要的原因不是分离液，而是脐血本身的特性，你可以上网查查脐血与正常外周血的区别，然后网上能找到很多关于一些分离脐血的经典方法

chenlin080102

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. n; h" m0 V" D, I还有就是脐血红细胞对红细胞裂解液不敏感，基本上没什么反应，我这边尝试的是这个结果，因为脐血的红细胞与外周血红细胞特性不一样