新手求教，诱导分化21天，细胞都长满了，如何解决这个问题？

梦月寒

如题

wf78365421

传代

梦月寒

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( s7 @7 F8 H# Y* W
* a- L* ]* [, S$ `. l4 g加药的怎么传代

saier.HK

血清浓度降低些，5%FBS jiuOK; Y  x2 b* z! n1 ~3 h$ N  A

yinchong42

什么的分化？成骨吗？一般来说诱导分化都是需要考虑细胞增殖的，很多时候需要控制实验开始时细胞的数量
# a' X* m4 C; T

漂流瓶

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! e  H2 U% T1 ~: ~( B- |
; E: p3 C4 j3 v( L2 E7 y. J同意，这类试验在开始的时候就要考虑细胞接种密度吧。虽然这个说起来容易，其实操作起来不是很容易。我培养的是神经干细胞，如果接种密度太小，很容易分化或是凋亡，可是如果过大，增殖过快，最后成像效果又很不好，所以只能慢慢摸索了。

yinchong42

回复 漂流瓶 的帖子6 a" Z8 F& m* ^9 G* `' o
1 G/ m0 ]! D% Y4 v7 T& X
我是做成骨诱导，但是我们的诱导培养基是具有抑制增殖功能的

漂流瓶

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* Y! V4 `7 F6 S* g* Q& D( \; l1 h' G! H' n
哦，所以你培养的成骨细胞应该是增殖很缓慢或者基本不增殖才对，是吗？这个我就不知道了。目前我在做的蛋白中，有一种小分子应该也是具有抑制作用的，抑制分化增殖和迁移（目前的假设），可是实际实验过程中，对于分化和增殖的影响却很多样性，并不是我们一开始推论的纯粹的抑制作用。这个机理比较复杂，里面包含很多影响因素，并且体外和体内环境也不完全一致，所以我目前也在摸索中。

梦月寒

回复 yinchong42 的帖子* O+ f2 b# I1 _: A' ~9 J

- C0 C, Z  R- c/ C; Z$ M* ^我也做成骨诱导，请问你的抑制增殖用的什么，还有做CCK8测增殖不是矛盾了吗

yinchong42

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# W7 U3 ^& b  g9 K- o& ?2 E; b/ r
1 R: B9 q% U0 D2 p9 v8 x8 E/ f就是这个意思吧，以前我做肌肉分化的时候，可以说就是在血清饥饿的条件下培养，细胞在增殖受阻的情况下就会分化了，成骨诱导也可以说是差不多吧