细胞制备操作SOP

guanjun1314

哪位大神有“细胞制备操作SOP”相关的资料提供参考不？叩谢！

plum

% K& o. g$ c( A& [/ s+ C  N- P# {
这里有个CIK的，你参考一下。取之于民用之于民

yooung

1 v, N: q7 Q( u" c* ~! @$ X
: W* p5 y. h( E* c8 h# C  e9 g回复 guanjun1314 的帖子7 A2 s/ O7 J/ R" J+ e
0 ^( o: B8 H! H* h; Y' r! b
细胞制备操作SOP？SOP要求非常细，不同的细胞的制备SOP肯定不一样，所以你应该说明是什么细胞的制备操作SOP。
. H+ g1 L9 Z. L+ }- V$ E1 Z另附一份脐带间充质细胞的说明书，其中有部分可以用作SOP的内容。
6 a  a! T7 ?% g! h  D3 @3 Z

guanjun1314

回复 yooung 的帖子9 W8 W; {3 K# l. m% m5 n+ |
. |# u- d7 M5 F3 Y$ [$ l& x' x/ N
感谢提醒，我要的主要是针对CIK的，流程我们有，但SOP我真没有

yooung

回复 guanjun1314 的帖子* W$ q$ Z/ L# u* A' ^* [
( j3 x9 Y' X, m' u2 e- ?$ V  e: t
以前也写过一些SOP，我觉得SOP就是把流程细节化，把实际操作文字化，再加些注意事项，套上SOP通用的格式，就可以了。

guanjun1314

回复 yooung 的帖子. Y* V6 `1 }! y; h' i! V: _
3 ^1 w: ~/ u6 M3 X" U2 k" p
嗯，建议得好，采纳

guanjun1314

回复 plum 的帖子
' D4 H0 d! i1 J4 y* S8 p: I4 b0 V1 [0 D% M8 m) S
非常感谢

海南小石

9 e; T' d# X: I  G* v' a: R# d0 Z
有一个相关的，希望对你有帮助" E* ~" z2 E+ |6 E0 N  O) w4 s
一、目的
: T1 Z1 j# Y/ v1 S( k  v7 a+ M' B* u1 c  p' ^1 r. S* V
MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员，必须按照本文件相关的操作规程进行操作。! C* A- U) I- [+ H! r

2 q  K' J! L% P- }二、适用范围# Q) M1 O" h' w

4 F9 |5 C) E- U' o! y& Q适用于疾控中心所有技术人员 。- q1 l' |( @" B& n+ q8 S& k2 r) W
' s/ T+ n& u3 {2 n; G
三、程序
4 u1 @8 @5 q; c$ O9 q' U8 T1 n6 b8 p! D  F8 h6 C' N- ~
（一）生物安全要求0 T! j3 M( H1 U2 @# _9 E8 H: I

# {2 B2 g4 d/ H( @7 ^  d" R. Q实验室生物安全级别：BSL-1
& `8 P( ]/ d$ n8 J
, w( V# f/ a# o所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。4 ]/ }7 P' }- B8 n$ {( D

. z# q, [# R5 C- x4 [（二）材料
1 X6 W0 E" g* j9 [8 [! A% G) k+ g; T$ N$ A  K* x% e  f2 E
1. 生长成片的MDCK细胞3 O8 _' n" l9 A% U9 C1 [

: L1 C7 g, W0 h0 m, y  G2. 无菌的T25细胞培养瓶
- G  _% `6 p) \9 X1 g2 g* s- K( T% l- N- L+ d
3. D-MEM培养液（含有L-谷氨酰胺）
; {) q* }5 \) g" \
7 Y) Z: z6 P% o7 b4 Q# {+ {4. 青、链霉素母液（10000 U/mL青霉素G；10000µg/mL硫酸链霉素），分装后保存于-20℃
1 m* J# @6 |" F, h5 d& W* i/ ^( d/ ~9 l
5. HEPES缓冲液，1M母液
5 q4 y+ A. i+ D% ]' l' ?% e" ?9 }2 i# l, |- Y2 q. f
6. 胎牛血清7 f, J2 v; R6 i  b
; R' Y- Q; L7 ~* `
7. EDTA-胰酶（0.05%胰酶，0.53mM EDTA-4Na），分装后保存于-20℃# o" f5 o! `' `0 x& i6 n% ]. s
7 T! ], T5 L# ?( g! ]& l! w8 ?$ l9 q
8. 7.5%牛血清白蛋白组分V
: l7 t6 k7 U, v2 }3 w: Z* q
# I9 A( Q! Z% w% x7 p- ?9. 1mL、10mL无菌移液管- u+ H6 x  P5 ]9 h3 g, G0 S( V

" R" ?1 ?/ p- \# \8 [; m0 U10. 70％～75％的酒精
0 R% ^7 f9 ~3 j1 v
' ?: f- M9 D. J/ z& I! R) S  u* t% @注意事项：经常检查试剂使用的有效期。4 ]/ [: j* c7 }4 `& D

$ X  w/ x  m% v1 Z1 h6 Y0 M（三）实验步骤1 P  P$ k1 m! X

* W8 G5 v8 u& O3 }- ^8 t8 ?这里以T75细胞瓶的单层细胞培养为例，叙述MDCK细胞的培养程序。如果细胞瓶的规格有变，MDCK细胞悬液的量必须做相应的调整。/ _+ A- Z9 P" s+ f: v
& U: Q) G' s) U( E* R7 H
1. D-MEM培养液的准备9 x2 W) W! U! O" i

# r/ z8 [/ z, K5 y: ~500mL D-MEM液中加入：' @6 ~7 y) H- _5 R% \# Q, H  W0 f

% @2 s$ F( f9 h7 U青、链霉素母液5mL（终浓度达：100U/mL青霉素；100µg/mL链霉素），
- P, X, ~- Z, i1 R! C" b9 v( W2 U5 i( ~
HEPES缓冲液12.5mL（终浓度：25mM）。
! [) o3 j" s& V/ ^- |$ V, _
) k# ^8 d1 g  d" Y7 K2 B7.5%牛血清白蛋白组分Ⅴ 12.5mL , `- U% }2 f! y9 R
1 R( h. @  S8 d. k: |1 _: z
2. 细胞生长液的准备8 V( d( G/ F: {" r: {
/ f# W  h& V- b/ b3 R8 g
胎牛血清10mL加到90mL的上述（1）的液体中，使胎牛血清的终浓度为10%。) |( v1 Y) K2 G; p
* L. [/ c0 {2 c' r* W
3. 首先将细胞培养瓶中的培养液弃去，加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶。
+ I% n5 ]. A) o2 a" [" j  T; }9 V- p' D! y
4. 温和地摇动细胞瓶1min，使EDTA-胰酶均匀分布在整个细胞薄层。然后用移液管吸去EDTA胰酶。
& `( Z: i/ I( a6 d) _0 z4 G( f- X) e$ z
5. 重新加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶重复上述步骤。) `  q& K, _- p

' `; E! `7 Y( b) y! S- e6 y6. 加入1mLEDTA-胰酶使其均匀分布在整个细胞薄层，37℃孵育细胞瓶直至细胞从塑料细胞瓶的表面分离（约5～10min）。必要时可以摇动或吹打来分离细胞。然后加入1mL胎牛血清灭活残余的胰酶。1 K- Z% k4 f  K. w$ C# ~! e

' K6 o6 j# q* {* P8 ?9 b7. 加9mL已经配置好的含有L-谷氨酸的D-MEM培养液，轻轻用移动移液管来吹散细胞团。
* @9 I, B8 q/ i: F
& a+ t4 i8 T. h# d0 y5 {( z8. 取10mL混合物加到90mL细胞生长液（细胞悬液的浓度大约为每毫升含105细胞）
' Q1 {8 a/ C2 j* y' @7 M
2 W6 n  H+ a6 q! K" _+ y" D9. 每个T25细胞培养瓶加入6mL（6×105/mL）细胞悬液，剩余的细胞悬液可以加到T75细胞瓶用于细胞传代。通常6mL细胞悬液2～3日可生长成片（80％～90％）的单层细胞。# E( L" a- B, r, _4 u: `" ^( ?, S

* K5 Y* G* {( R10. 于37℃，5%CO2培养箱里培养细胞，每天观察细胞状态，以供进一步实验用。) D( Y8 G! c- d/ A" o# S

xiaoxiaodeji

制备的sop根据实际操作流程规范化细化就好了，问一下，各位有没有实验室规范管理的相关文件

gyjjsw11333

为什么下载不了呢