细胞制备操作SOP

guanjun1314

哪位大神有“细胞制备操作SOP”相关的资料提供参考不？叩谢！

plum

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0 C% I! g! J" R  u$ p. X0 f这里有个CIK的，你参考一下。取之于民用之于民

yooung

, j# |! D8 g( q. J; T% X" R, I  M

5 F/ [* O% D' M回复 guanjun1314 的帖子+ w3 d# J- M/ P* t# V: s4 x2 L

1 r# O. f9 o( u9 b) U& t细胞制备操作SOP？SOP要求非常细，不同的细胞的制备SOP肯定不一样，所以你应该说明是什么细胞的制备操作SOP。; n. F) n, L5 s* [/ l8 [  z8 B) R  L
另附一份脐带间充质细胞的说明书，其中有部分可以用作SOP的内容。
% n" u0 e3 u  Y% j1 E: I

guanjun1314

回复 yooung 的帖子3 C0 ?( c- S) P0 r0 b- S
: W% L; G/ `6 l) k) {
感谢提醒，我要的主要是针对CIK的，流程我们有，但SOP我真没有

yooung

回复 guanjun1314 的帖子: n7 n9 \! k  u; x8 @

1 @. I3 Q  `+ q0 @& d以前也写过一些SOP，我觉得SOP就是把流程细节化，把实际操作文字化，再加些注意事项，套上SOP通用的格式，就可以了。

guanjun1314

回复 yooung 的帖子
3 _+ ?) D& l, V, Y8 C7 E
6 E. z/ b1 h+ i! B' Q8 c嗯，建议得好，采纳

guanjun1314

回复 plum 的帖子1 j* M; @" }) ^4 k  x# s! m3 w; t

- H4 I8 Q+ ^( R& z  g0 z$ {非常感谢

海南小石

2 X8 O2 U; B, @7 L" p! N/ M1 j$ V- w3 N- N/ l. }$ b
有一个相关的，希望对你有帮助
  F( S: V3 F' V( e1 d( v# F2 Q一、目的
! {  }' m6 j+ ]# I8 }; a. q& k! q/ Q, g3 ]7 Z
MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员，必须按照本文件相关的操作规程进行操作。
5 A3 ^( k) {+ h* ], q1 }! l& N+ F% E! ?6 c
二、适用范围
8 P! @  W3 e% ?/ _% l4 @2 S/ c9 q+ q- n, P+ N
适用于疾控中心所有技术人员 。$ N1 O3 K7 o+ _& t
2 _3 u" x; ~) p7 w# a9 L" b: m; E/ R  t
三、程序8 C. X" M) ?' Z* A; t* \3 o
* o. f' s6 P& @5 _) |
（一）生物安全要求
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( N3 a: `/ v0 o, ?. J9 p实验室生物安全级别：BSL-1
6 {8 |! l# i4 T& X7 m6 ~% m8 H- l3 s3 J
所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。
$ d% v9 @) e+ W3 k" E5 I0 C# H: ]5 J4 N: b1 k
（二）材料
( |' e* c! \; ?7 x$ J. }5 f2 ?
1 T( E2 X( e5 F: \3 j1 `1. 生长成片的MDCK细胞' Q& z# [! x, T% T' `
* s1 \0 o! D! D: I: N. t
2. 无菌的T25细胞培养瓶
- ^, a. I) v. u/ l. Z0 K( B) z
. b2 `3 z% g& Q# d( S3. D-MEM培养液（含有L-谷氨酰胺）! f* M+ d0 H0 A6 [

# {2 M' g* I( O8 i$ q& A; J4. 青、链霉素母液（10000 U/mL青霉素G；10000µg/mL硫酸链霉素），分装后保存于-20℃
6 z. S- B' Y) K* c) F8 _
( o! r0 Z4 ?. Z2 G1 \5. HEPES缓冲液，1M母液& @1 K( I8 V* n9 y$ p6 v
$ Y3 l* U; N* c
6. 胎牛血清
" F8 i0 @% m. G- Y1 B/ y! p7 x4 v4 A- c) d. B# k5 E6 r
7. EDTA-胰酶（0.05%胰酶，0.53mM EDTA-4Na），分装后保存于-20℃  T/ e* {1 M! X' l$ u2 L+ X8 x

/ p& `2 F, b% ]. a# S1 o" G% U8. 7.5%牛血清白蛋白组分V$ J* t0 i2 d, A" `
: ?" Y2 s& N3 c
9. 1mL、10mL无菌移液管
; x& _# K1 T0 x) c( ~2 U1 r2 E/ Y; I" w1 ?6 p9 f  d4 J8 ~
10. 70％～75％的酒精3 q4 W* n* b. F5 E0 r1 G& Y

" l, I! V. k8 z) G$ ?  v注意事项：经常检查试剂使用的有效期。
8 G7 \' Z( u* o( Y, n" u- a! F" v8 K( S& e  r
（三）实验步骤7 V! ~5 ^7 d0 ^9 X/ }6 m

: V+ X0 \4 R, S- c* x这里以T75细胞瓶的单层细胞培养为例，叙述MDCK细胞的培养程序。如果细胞瓶的规格有变，MDCK细胞悬液的量必须做相应的调整。4 A2 `+ z* z6 U( ~) c
1 x6 ^/ y1 d4 T1 ]- T+ N* B2 }, c9 q. F
1. D-MEM培养液的准备* u# ]: e1 @6 b4 I: b
  Q: G& [! i- X6 `) P( q& b
500mL D-MEM液中加入：
9 R% ?! n0 K& G8 E* _
' h, V5 u3 z- g1 |1 U% D3 `青、链霉素母液5mL（终浓度达：100U/mL青霉素；100µg/mL链霉素），8 \( d9 J; p$ A7 K. }
9 D2 N& [( i4 A+ C0 J
HEPES缓冲液12.5mL（终浓度：25mM）。
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0 d  E3 H$ Y, P. @& @7.5%牛血清白蛋白组分Ⅴ 12.5mL 2 }: J/ P1 _8 g" x8 n
) W8 L+ c/ W+ Q1 [, v! w
2. 细胞生长液的准备
8 x2 s  J  v+ _% y/ u, ], {, j
胎牛血清10mL加到90mL的上述（1）的液体中，使胎牛血清的终浓度为10%。
( D( M+ ~4 j8 t7 t  B1 c' A3 B: s/ V8 ?& t% O* M/ o9 {% {
3. 首先将细胞培养瓶中的培养液弃去，加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶。; n; v2 Y( i5 b" P

" c- f. d1 l5 Q. B5 m! `4. 温和地摇动细胞瓶1min，使EDTA-胰酶均匀分布在整个细胞薄层。然后用移液管吸去EDTA胰酶。' g7 L, l, N" Z4 b# I; Q; z& @
$ t( N, Q. ~  ?7 L( O! N$ m( Q& z
5. 重新加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶重复上述步骤。
- @; Q7 Y3 R8 e
  {- W7 x- g& u1 x. ~6. 加入1mLEDTA-胰酶使其均匀分布在整个细胞薄层，37℃孵育细胞瓶直至细胞从塑料细胞瓶的表面分离（约5～10min）。必要时可以摇动或吹打来分离细胞。然后加入1mL胎牛血清灭活残余的胰酶。$ _6 `5 Z* }) L
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7. 加9mL已经配置好的含有L-谷氨酸的D-MEM培养液，轻轻用移动移液管来吹散细胞团。. I6 z( r9 i- ~" [  I9 E
- i. M  k' E- O8 @+ t
8. 取10mL混合物加到90mL细胞生长液（细胞悬液的浓度大约为每毫升含105细胞）
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9. 每个T25细胞培养瓶加入6mL（6×105/mL）细胞悬液，剩余的细胞悬液可以加到T75细胞瓶用于细胞传代。通常6mL细胞悬液2～3日可生长成片（80％～90％）的单层细胞。
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10. 于37℃，5%CO2培养箱里培养细胞，每天观察细胞状态，以供进一步实验用。- G+ d2 G0 E' j; T% M& U2 n) O. F

xiaoxiaodeji

制备的sop根据实际操作流程规范化细化就好了，问一下，各位有没有实验室规范管理的相关文件

gyjjsw11333

为什么下载不了呢