CAR-T细胞培养中慢病毒转染的问题

六弦七品

最近养CAR-T细胞转染效率老是上不去，大家病毒滴度一般用多少？转染后细胞状态明显变差，照理说用的慢病毒都是缺陷病毒，不能复制，进入细胞后又不会消耗细胞营养，为什么对细胞损伤这么高？

zmfang555

你是不是用了polybrene?如果用了这个增强剂的话,会对细胞产生毒性,毒性强度与你加的量有关.

六弦七品

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+ Y0 U' H! @5 t0 e+ E8 V1 y! Z没用增强剂，有人说是慢病毒的VSVG蛋白对细胞有毒性，做过的人有遇到类似情况吗？

winqi

polybrene 肯定有毒性的，而且毒性还比较的大，需要换，你用的cmv还ef-1a作启动子啊？这两个可能有不同！

riverdtang

你是CART转不进去还是病毒转不进去， 如果只是CART的话要考虑载体和病毒的问题，比如启动子啊，滴度，转染时机等，如果对照GFP都转不进去的话可能就是体系或者细胞的问题了

六弦七品

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: \0 E3 P( H' t/ }. S我们转T细胞的同时转293T，293T是可以检测到CAR的，T细胞检测不到，现在不知道问题出在哪

riverdtang

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T细胞可比293T难转多了，293T只要活着、状态不差，都能转进去的，T细胞分离后转染的时机，MOI，刺激的条件都很重要，建议你还是用GFP病毒转一下T细胞，优化T细胞本身的转染效率再转CAR

ET生物人

慢慢发现，不同人的T细胞感染效率差异有点大！！你们做的T细胞是来自哪里？来源稳定吗？

木子小王令

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1 u  t; Q9 n$ Y你好！我是刚接触慢病毒转Tcell的实验，请问初始摸索的过程中，一般慢病毒转染Tell的时机，细胞接种量，MOI可以设定多大的梯度范围呢？我试过一次，Tell接到6孔板中是3×10^5/well，MOI为200，作用时间48h都没有换液，细胞状态还是很好，但是转染效率很低，不足10%的样子。

riverdtang

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2 U4 f. Z* ]$ Z& tT细胞分离后用抗体刺激48h转，MOI：10-50我们的转染率就很高了，50%以上吧，感染第二天换液，铺板密度10^6/ml都可以，我觉得可能还是细胞激活的问题