CAR-T细胞培养中慢病毒转染的问题

六弦七品

最近养CAR-T细胞转染效率老是上不去，大家病毒滴度一般用多少？转染后细胞状态明显变差，照理说用的慢病毒都是缺陷病毒，不能复制，进入细胞后又不会消耗细胞营养，为什么对细胞损伤这么高？

只因偶然

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& _% y: T& }3 n9 P* ?/ e1 E4 ?7 [; l, H( a0 H3 q7 X
你好，我做car-t，慢病毒感染后第5天开始细胞生长速度变慢，不知道是什么原因

只因偶然

回复 riverdtang 的帖子0 L4 f% N: X8 P2 y! f3 |
0 m' E5 J( R6 X& R7 ]. I! L2 r* i9 C
你们测转染率是什么时候测的？为什么我们养的CAR-T，转染第5天后（转染第2天换液），细胞增殖速度变慢，活性下降了呢

jinhaifeng

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4 {# J1 C, M4 z
. J3 r5 p6 q7 `% k  A! k请问你们用聚凝胺了吗

riverdtang

回复 六弦七品 的帖子8 v4 t) o+ s8 N7 c9 v' k9 @2 I

% D3 T% t3 o8 r: h/ a/ ]; O启动子试过没有什么明显的差别，还是转染时机影响吧，分离激活后尽早转会好些

六弦七品

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* y9 @  `0 K. s! O3 A, D
6 J& H9 S' H+ L% x" y用的CMV，最近准备换ef-1a

六弦七品

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% I( ?0 E4 p. U# P, i, A0 L: d
6 [9 v9 ?$ E; m3 g1 T3 e3 R你们转染效率这么高，我们都用了RetroeNection加polybrene，还是没多少，应该是载体有问题，你们用的那种载体？

ET生物人

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. X6 N% h( `6 }  ^* Y% s6 \. O" O
) {; ?4 }4 |7 k  q! E6 a  o% q你们是用什么培养液的？？怎么转染率这么高，我们感染效率一直都很不稳定。

木子小王令

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5 K. m# l+ n  j: H1 }3 A5 n
. {6 _. C* ]+ v( R! i% T6 {: K恩恩！谢谢大神！
, U) _+ O, ~" s& r: _1 l我下次试着做个梯度，有问题还请多多指教！！！

riverdtang

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6 [  a! \, i$ P1 z: X0 b4 j5 i0 b6 b
是的，第九天转那效率肯定不会很高的，我们分离就刺激，浓度看你们所需的细胞种类和抗体质量了，这个需要摸索一下，不过你们可以长到第九天还有10%转染率，那刺激可能不是最大的问题，你可以试下分离2-3天转，可能会好些。悬浮细胞不需要铺板啊，直接转就是了，第二天换液。