小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

本人原代操作步骤为：1、处死小鼠，75%酒精泡5~10min，并准备3个盛有培养基的皿。% ~# J$ D$ H2 W$ k9 h3 k+ V
2、先初步分离小鼠的股骨、胫骨和肱骨，放入第一个皿中。
9 D* c# b6 W7 c# C5 [3、仔细出去骨头上的肌肉和筋膜，放入第2个min
# v+ n7 T' D0 ~. _4、减去骨的2端，用1ml注射器吸取培养基吹出细胞，只到细胞泛白。
: ^  ?  v# |  k5、收集第三个皿中的细胞悬液，800g 5min，去上清
8 x( [; Z# ]+ W% L) V/ _+ l6、制备单细胞悬液，接种到一个皿中。
! Z* i; _$ R: @) `6 n今晚刚做到这里，不知道明天结果如何，以上步骤如有不足的地方欢迎大家指出。
* F% ~" c4 r$ s3 z6 z# r此外，个人觉得仔细分离骨头上的肌肉时，将其放入75%的酒精中泡几秒会比较容易剥离，但至于是否会影响到里面的BMSC还不知道。

china1983chen

学习了，谢谢楼主

angel-sakura

欢迎大家来讨论~~本人也是第一次做原代培养~~

tanhehe1006

有可能有很多造血干细胞的污染的。小鼠骨髓MSC的培养其实和人与大鼠的还是有区别的
1 e$ _% p( d* \你可以参考下面两个文章，都是来自Nature protocol的$ [( `; [" ]" c) N. U. _, u4 n

china1983chen

我昨天也是第一次做，可是出来的细胞都是圆圆的，不知道是什么细胞

china1983chen

回复 4# tanhehe1006
4 u+ j8 g0 j+ Q" J# v
8 \& f7 {$ h4 L; ^$ Y" D* }: a4 @* _# t2 {, Z) h: }! Q! I* S
    非常感谢，谢谢

tanhehe1006

附上我养出来的小鼠MSC图片吧

bypw

看了楼主的东西和步骤，我觉得大部分是一个常规的操作，但是有机电可能存在问题：
! Z! n7 P( x. x+ r% k, B2 P: V
  C, t; N9 E- ~- c5 b1 p4 I1  取材上好像很少去肱骨吧，就是前肢，是不是这样效果很好啊
0 U7 {' c/ }& R. I
! v; A4 O0 h8 A2  减去两端，我觉得存在问题，因为干细胞主要存在干骺端，去掉后干细胞将会很少，建议直接穿刺冲。
9 G+ F0 x0 G# K! W) X2 ?9 R3  冲出后要轻轻吹打，让细胞混匀，注意轻( c, i* B( d# k: H
4  不要用酒精泡啊，

jisuyun

MSC是梭性的，你的图片多角形的应该是成纤维细胞哦

china1983chen

回复 7# tanhehe1006 - d1 W8 D* Y3 Z

( }6 x" @- ^4 \3 `6 R  P/ A! j2 R/ j/ |* r7 e
    这是原代细胞吗