讨论

火云豹

在培养肿瘤干细胞的时候  培养基中要加入胰岛素 大家都是怎么溶解的呢

ambassador

/ r$ q6 W) Z% D0 a& o: }" z- Z0 P0 Q: q, n: `
你是说加胰酶吧！" y; R( @7 ^0 u/ ^' A* [
我们以前养海拉细胞的时候，大概是这样的流程：
3 V+ C6 P- L# C1 h$ V1 u1.胰酶和EDTA(按一定比例，我忘了具体多少...)称好以后，9 i+ q8 `0 x3 h0 o+ Q. ]- W
2.用双蒸水溶解，
" V0 X/ E8 K5 w) e3.电磁搅拌仪搅匀，
& U2 Q3 ~  u! R# I2 K& z4.再微孔滤膜过滤

daviddow

你看看sigma那里有说明，胰岛素是怎么溶解的。那里有个单子，是说各种物质的溶解方法。我就不给你找了。要是你找不到，就联系我

火云豹

呵呵 我这里每次来的sigma的产品都没有附带说明书 很麻烦

chuanbaozang

用1ml的酸化水溶解10mg胰岛素，溶解过滤分装，使用终浓度为10ug/ml。
6 S4 W1 p6 _, r: o- l7 k# w/ d' R6 ^酸化水是100ml中加1ml左右冰醋酸，调节pH为1.9左右，高压灭菌，冷却即可。
" q" a) O! c1 l2 A/ Y" M3 j2 P如果在超净台中打开sigma的胰岛素原装，我个人认为可以不过滤灭菌的。
, f9 E7 A, n* v  p# S) j以上仅供参考。

angel-sakura

回复 2# ambassador
9 J( }* q8 G' N+ F2 w. g用双蒸水。。。。这不会改变溶解渗透压了吗。。。细胞不都死了，PBS溶吧。。

ambassador

回复  ambassador
& j+ ?% u* w( Y  t用双蒸水。。。。这不会改变溶解渗透压了吗。。。细胞不都死了，PBS溶吧。。
. i" q1 |* ^4 _angel-sakura 发表于 2010-5-25 12:31

7 I+ L& v7 k* M- ~7 y
1 e( V4 m9 ?; m0 Y' o! o1 }, D; ]9 W: q. n2 u9 Q
    可能我们那时没买PBS，是用胰酶与EDTA按一定比例来调节渗透压的。

haijunlv2004

1ml冰乙酸加到100ml双蒸水里制成酸化水，100 mg Insulin 用27ml 酸化水溶解，浓度约为100U/ml，过滤除菌，分装成1ml/EP管，-20℃保存。
( ~$ I9 \* e# O7 }用时先将1ml的储存液溶于5ml Hepes 中，再加入到500ml 培养基，终浓度约为0.2U/ml。) @; u  E" k$ _5 Q4 }
切勿直接将1ml储存液加入500ml培养基，会导致无法溶解。

火云豹

大家各抒己见 结合现有情况实践中