重读 山中的文献，再问问题，四个外源基因 Southern为什么没有做？

上海过客

重读 山中的文献，再问问题，四个外源基因 Southern为什么没有做？
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8 {( N1 n" ]2 K3 y+ d- A0 v既然证实了  转入四个基因 以后 会发生重编程，那么没有转入的细胞是不能编程的。
+ l. L4 `8 F& p$ ?, `4 F6 I7 I- M* q+ s; y& @7 @
iPS 都被转入了四个因子吗 ？   
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) ~. \; _4 S7 @  ^/ N1 j现在不是说 直接用病毒转染也可以 得到 iPS细胞吗 ？- A7 O- ]# H$ o4 _( s

( g! ~% Q- c$ @) s/ L3 e: _( s  p5 i5 x) g, t  Z
或者干脆用  ES培养基来 养 MEF细胞 ，养14天 ，会是什么结果？  以前没有人这么做过吧  ？

amazingt

很困惑，纠结ing

amazingt

不知道事实是什么样子，至少在无重编程因子存在的情况下的确是可以产生类iPS克隆的。也不认为会犯什么naive的错误，我看高人刘有话说，虽然有些观点也不敢苟同。

marrowstem

正如8楼所说的，我也有这点疑问，难道这些世界著名实验室的大牛能犯这么naive的错误吗？

treestem

回复 7# amazingt 4 ^( w" m9 l$ e4 R( W/ t  }
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    可是，如果如你所说，任何因子诱导，都有可能出iPS克隆，但事实却不是这样，kamanaka的那篇文章及后来人的实践都是遵循这一规律啊

amazingt

"干脆用  ES培养基来 养 MEF细胞 ，养14天 ，会是什么结果？  以前没有人这么做过吧  ？". }1 r2 y: @" Q5 c
* i$ R$ j% A6 _1 s8 N8 }
我做了这个，作为阴性对照。可是和双刀的猜测正好相反，有类iPS克隆出现。

上海过客

楼主，请问你说的“现在不是说 直接用病毒转染也可以 得到 iPS细胞吗 ？”是指哪篇文献？谢谢！我认为，如果 ...
4 [* l8 d, I& `' C双刀 发表于 2010-7-16 10:51

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* u5 ^2 E- d' B# t" n8 |$ H$ b& f新闻版里去找线索 吧 。
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MEF 里 就一定 没有多能干细胞吗？  为什么非要重编程呢？如果本来就存在多能干细胞呢？     你怎么排除 这个阴性对照的问题呢？ 用什么方法呢 ？5 V4 O, Q0 V* Q# {0 j' @
诱导过程中出现的克隆就一定是  重编程的细胞吗 ？你 说是，那你用什么证明你的 细胞是经过重编程的 呢 ？- U# m0 I0 ~- b( ]8 P/ h! w+ E

: T3 N7 h8 I( H4 y' q我想起来一个科学笑话。% j/ s* a+ L" Y8 C: Z

, g; U1 X: l! g) W2 @7 u) J1 I一个科学家说 ：我发现了一个非常有意思的 现象 3 Q+ X! o/ ]4 O) n( i
  我做了一个实验： 我对跳蚤说跳，它就跳了起来。  然后我把跳蚤的腿都弄断了以后呢 。  我再 说跳 ，跳蚤置若罔闻 了 。所以结论就是： 跳蚤 腿没了以后就变成了聋子  。/ V: R& z* K. L% ?/ W# z% @8 e, u
  Z. B% V9 E0 u8 f7 E8 Z( B8 O0 w4 N
    . E6 w9 O& w9 i2 @" l
所以我认为 山中这个SOUTHERN没有做 是绝对的失误  。我觉得经费问题应该也解释不了这个问题 。 毕竟他 150种敲除小鼠都做了 ，  做个 SOUTHERN 是没有什么难度。# U* V' C: M+ G( i  r9 @8 p$ Y
     SOUTHERN  是唯一能证明 iPS细胞是 转入了四个基因的细胞。这个也只是必要条件，还不是 充分条件 。        3 G: O3 X' w& W! s% b

5 L, w! N- L: f( ?; A: b) c9 B1 v  他这篇文章的附录里列了外源基因的  PCR引物，但是目前没看见  PCR结果 。 看过的同学   请  指出  。谢谢。

双刀

楼主，请问你说的“现在不是说 直接用病毒转染也可以 得到 iPS细胞吗 ？”是指哪篇文献？谢谢！我认为，如果是空载的病毒载体应该是不会诱发重编程的。ES培养基直接培养应该也不会得到iPS，因为ES培养基中的成分并没有诱导重编程发生的能力。个人见解，如有错误，请指正

wangming

小分子物质诱导也是同样。

baixueyao029

想法不错，你可以试一试