重读 山中的文献，再问问题，四个外源基因 Southern为什么没有做？

上海过客

重读 山中的文献，再问问题，四个外源基因 Southern为什么没有做？+ r& R% H( q% q! K

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' R8 b$ W0 M5 S7 J+ \既然证实了  转入四个基因 以后 会发生重编程，那么没有转入的细胞是不能编程的。
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5 l6 F' j) i: Y; M$ R) x( a6 siPS 都被转入了四个因子吗 ？   
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现在不是说 直接用病毒转染也可以 得到 iPS细胞吗 ？
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5 l! e% ^, b9 g; \2 M& {" Y或者干脆用  ES培养基来 养 MEF细胞 ，养14天 ，会是什么结果？  以前没有人这么做过吧  ？

marrowstem

Good question  and  try to do it.

baixueyao029

想法不错，你可以试一试

wangming

小分子物质诱导也是同样。

双刀

楼主，请问你说的“现在不是说 直接用病毒转染也可以 得到 iPS细胞吗 ？”是指哪篇文献？谢谢！我认为，如果是空载的病毒载体应该是不会诱发重编程的。ES培养基直接培养应该也不会得到iPS，因为ES培养基中的成分并没有诱导重编程发生的能力。个人见解，如有错误，请指正

上海过客

楼主，请问你说的“现在不是说 直接用病毒转染也可以 得到 iPS细胞吗 ？”是指哪篇文献？谢谢！我认为，如果 .... h6 y& U7 {; K7 ^& B0 I
双刀 发表于 2010-7-16 10:51

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0 E/ c0 N- {" _) m+ {新闻版里去找线索 吧 。9 V0 K, N, D$ y3 k, L

. {! b# w$ h4 q* C+ jMEF 里 就一定 没有多能干细胞吗？  为什么非要重编程呢？如果本来就存在多能干细胞呢？     你怎么排除 这个阴性对照的问题呢？ 用什么方法呢 ？
5 R! P7 H% k+ C: B  o2 i 诱导过程中出现的克隆就一定是  重编程的细胞吗 ？你 说是，那你用什么证明你的 细胞是经过重编程的 呢 ？
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( s7 q" z# J* D! T我想起来一个科学笑话。
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" \' T" f" h) c* i1 I9 t/ G一个科学家说 ：我发现了一个非常有意思的 现象 : b  R8 m) v. d- t8 J
  我做了一个实验： 我对跳蚤说跳，它就跳了起来。  然后我把跳蚤的腿都弄断了以后呢 。  我再 说跳 ，跳蚤置若罔闻 了 。所以结论就是： 跳蚤 腿没了以后就变成了聋子  。
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5 h8 c5 L8 O# U% J5 L    3 U, n# ~! ]9 N; i) U4 M$ u( W
所以我认为 山中这个SOUTHERN没有做 是绝对的失误  。我觉得经费问题应该也解释不了这个问题 。 毕竟他 150种敲除小鼠都做了 ，  做个 SOUTHERN 是没有什么难度。  x. }+ F4 w3 T- a6 s
     SOUTHERN  是唯一能证明 iPS细胞是 转入了四个基因的细胞。这个也只是必要条件，还不是 充分条件 。        
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  他这篇文章的附录里列了外源基因的  PCR引物，但是目前没看见  PCR结果 。 看过的同学   请  指出  。谢谢。

amazingt

"干脆用  ES培养基来 养 MEF细胞 ，养14天 ，会是什么结果？  以前没有人这么做过吧  ？"/ {- j" N1 S  A5 g
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我做了这个，作为阴性对照。可是和双刀的猜测正好相反，有类iPS克隆出现。

treestem

回复 7# amazingt / T; T/ p8 n/ b6 \2 V
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8 T7 W1 ]3 h: L2 S" S  A( _    可是，如果如你所说，任何因子诱导，都有可能出iPS克隆，但事实却不是这样，kamanaka的那篇文章及后来人的实践都是遵循这一规律啊

marrowstem

正如8楼所说的，我也有这点疑问，难道这些世界著名实验室的大牛能犯这么naive的错误吗？

amazingt

不知道事实是什么样子，至少在无重编程因子存在的情况下的确是可以产生类iPS克隆的。也不认为会犯什么naive的错误，我看高人刘有话说，虽然有些观点也不敢苟同。