关于油红O染色

feiyang

请教大家！我做MSC诱导分化为脂肪细胞的油红O染色。1.在油红O加三蒸水3：2稀释后，没有通过定性滤纸，而是通过70um过滤篮过滤，然后静置，可是染色结果不好，看起来好多脂肪细胞并没有染上色，而且还是有不少杂质。2.一定要淡苏木复染吗？我没做。

glysh

hah 太巧了，我今天刚了油红染色，效果还不错。
6 m. `$ b. a4 H) [4 ^8 a4 `" m4 n第一，没有滤纸的话，可以用口罩过滤；一般没有上色的很有可能不是脂肪细胞；! X' y. U6 Z6 F. G4 |' L$ u* E
第二，不需要苏木素复染

regene

呵呵，同意楼上，不过滤问题也不大，但最好过滤以去杂质。. C7 I  Q# i' `
即使不染色，脂滴在光景下也是很容易分辨的。

luoziwei

是的，显微镜下就能观察到油脂滴的

tangyvhuang

我们的规定是五步，但是基本上就是前两步就够了，后面的不做都，也不用过滤# @- k# F; E1 W0 F6 g2 I" M6 D
油红O 0.5g 溶于100ml异丙醇中作为储备液，用的时候同蒸馏水3：2的稀释
$ d. i4 f2 V2 e. p; K4 v, k* J! s9 q脂肪细胞的油滴很明显的2 H5 x  X" I5 G2 K
1，固定：吸弃培养液后加入固定液5min.
9 w3 X1 B' k+ W( N- A2,吸弃固定液，加入染色液15min后水洗一次镜检观察。2 d; s" b- [8 v* y* Z5 T
3，60%乙醇分色，+ d4 j$ ?  U* u7 _1 k
4，苏木晶复染
; b7 I2 M4 I9 P) g3 ~4 m$ K1 h5，水冲洗至变蓝。- |8 G/ o( W0 X7 B. _2 Y

feiyang

我镜下看到很多脂滴的细胞，就是没染上色，不知什么原因呢？

glysh

回复 feiyang 的帖子
) _( Y% _' h7 b, x+ k9 ^6 B% {
- R! v/ ^! V) {很有可能是空泡！

碧海蓝天

油红O是为了染脂滴,而苏木素是为了染细胞核,可以帮助看清细胞形态,
+ }, u) u0 j: S% c" y5 j我个人认为油红O在染色前是必须要过滤的,否则杂质太多,影响观察视野.
. C- z) v7 M8 H3 o# C, `另外油红O染脂滴是很容易的,如果没有染上,那就可能不是脂滴而是空泡,
* l) a0 V! Y# [; ~. H还有如果低倍镜下看到有红色但看不清染色,最好换高倍镜甚至是油镜.

feiyang

那空泡是哪里来的啊？我染色的皿底有一块一块的染色，但是颜色非常深，镜下看就像是黑的，好像不对唉。

maxiaona

1、应该是需要过滤的，不然染色后观察时杂质很多。
+ _9 b; Z! S6 ]$ r2 L/ A0 e2、要注意配好的油红O工作液要在2个小时内用，不能放置时间过长。7 l1 E) r, V+ J' y* U* e
3、苏木精复染可以使细胞形态更清晰，拍出来的照片效果也会更好。
5 d0 W4 j* F$ q! q. m$ R4、之前固定的步骤很重要，没有染色很可能也和这个有关系，我们使用的是10%中性甲醛固定30分钟。
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