关于油红O染色

feiyang

请教大家！我做MSC诱导分化为脂肪细胞的油红O染色。1.在油红O加三蒸水3：2稀释后，没有通过定性滤纸，而是通过70um过滤篮过滤，然后静置，可是染色结果不好，看起来好多脂肪细胞并没有染上色，而且还是有不少杂质。2.一定要淡苏木复染吗？我没做。

glysh

hah 太巧了，我今天刚了油红染色，效果还不错。
$ V: u* |5 E6 _9 W2 [第一，没有滤纸的话，可以用口罩过滤；一般没有上色的很有可能不是脂肪细胞；& R+ I' h2 P1 Z( S5 m" G
第二，不需要苏木素复染

regene

呵呵，同意楼上，不过滤问题也不大，但最好过滤以去杂质。- B. f8 X+ C% r2 L$ I
即使不染色，脂滴在光景下也是很容易分辨的。

luoziwei

是的，显微镜下就能观察到油脂滴的

tangyvhuang

我们的规定是五步，但是基本上就是前两步就够了，后面的不做都，也不用过滤: `0 ]* O, J4 z% R5 _) c' E6 I
油红O 0.5g 溶于100ml异丙醇中作为储备液，用的时候同蒸馏水3：2的稀释! @" R, w% c1 S, t5 n) k
脂肪细胞的油滴很明显的
) }2 N$ o3 g- V" H/ I1，固定：吸弃培养液后加入固定液5min.
7 r$ ^8 @! R) [5 j) u/ |+ p5 \4 ~2,吸弃固定液，加入染色液15min后水洗一次镜检观察。# g% m/ l$ Y- ~. p( Y
3，60%乙醇分色，7 T: ^% }9 j6 z$ f( @
4，苏木晶复染2 x0 F" e% j$ P- b, t  f9 u  V
5，水冲洗至变蓝。
& |0 P. L* {8 A3 {5 C* O

feiyang

我镜下看到很多脂滴的细胞，就是没染上色，不知什么原因呢？

glysh

回复 feiyang 的帖子9 R- O2 @# i/ ^9 R) h4 E% W
9 ?; z( m2 u4 P8 \5 H! t
很有可能是空泡！

碧海蓝天

油红O是为了染脂滴,而苏木素是为了染细胞核,可以帮助看清细胞形态,
' z% F. R$ e. _我个人认为油红O在染色前是必须要过滤的,否则杂质太多,影响观察视野.
8 Q0 E: i; {! ^) c1 x; M另外油红O染脂滴是很容易的,如果没有染上,那就可能不是脂滴而是空泡,
- y1 B7 b) h! I( M: ]还有如果低倍镜下看到有红色但看不清染色,最好换高倍镜甚至是油镜.

feiyang

那空泡是哪里来的啊？我染色的皿底有一块一块的染色，但是颜色非常深，镜下看就像是黑的，好像不对唉。

maxiaona

1、应该是需要过滤的，不然染色后观察时杂质很多。1 A! ~% S4 d& v6 O* |
2、要注意配好的油红O工作液要在2个小时内用，不能放置时间过长。: x' Q8 ]. t3 n% @& p
3、苏木精复染可以使细胞形态更清晰，拍出来的照片效果也会更好。/ p# H1 T+ g, b  M% }+ s
4、之前固定的步骤很重要，没有染色很可能也和这个有关系，我们使用的是10%中性甲醛固定30分钟。2 _; N' W+ X6 |- [  P+ s