iPS细胞的传代

ly200101042

我用的是胶原酶IV，室温消化5min后，吸走胶原酶，采用iPS细胞的培养液终止，洗一遍后，用枪头轻轻吹，吹下来的全都是MEF细胞，这个是为什么啊，我的iPS克隆还在板上呢啊，这个是怎么回事啊
6 t  Z; E$ v0 @) P$ y/ o我是新手，希望吧里的各位兄弟姐妹多多帮助！:handshake

gact

你已经诱导成功了？. |8 p# Y: M& U- P+ j' k+ {  g, c' S" `

SCNT

用PBS洗涤了吗？

christophe

因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清不影响胶原酶IV的活性，无须终止，直接吸弃即可；; W- _, b( z8 i& i
如果还是消化效果不好，可以再用0.15的胰酶（之前用PBS洗一下）消化1-2分钟，然后血清培养基终止反应，在用枪头吹打一下基本上就能分散开了。

ly200101042

SCNT 发表于 2011-5-15 08:58 5 b  u7 m' w" k/ D0 m+ c* x; E
用PBS洗涤了吗？

* U/ f4 v" a* H洗了啊

ly200101042

christophe 发表于 2011-5-15 12:22 / E  f5 q2 y' ^% G7 `3 `
因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清 ...

- s: U" k4 P* b2 }呵呵 还行请教下您啊
) n0 K$ L1 q5 @  O6 ~% u  ?& m; [那MEF细胞也一起下来了啊' W2 a# E1 M2 z. B- [6 E
为什么我觉得我iPS细胞比MEF贴壁牢呢啊

ghfvcat

胶原酶IV，室温消化5min？
7 Z9 t% y/ d* Y: H3 Y! L6 d# W) w时间这么短就能消化下来啊，是小鼠的？好奇怪，消化人的时候一般都要消化上大半个小时的。

牙牙丫丫123

一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……
: ]$ a, B0 e  O" Z& X' |

ly200101042

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* ?5 ]  d$ ]3 x2 n5 u( b8 z6 l
为什么那么长时间啊 2 j! ^: v3 n+ `# a3 G& F
您是说分原代还是已经培养若干代了吗

ly200101042

牙牙丫丫123 发表于 2011-5-15 17:50 3 R- O! o% ~+ V) e  F, V
一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……

) k* `$ b  \7 |  o' l) S! `! i
我用的是1mg/ml 应该是1%的吧