iPS细胞的传代

ly200101042

我用的是胶原酶IV，室温消化5min后，吸走胶原酶，采用iPS细胞的培养液终止，洗一遍后，用枪头轻轻吹，吹下来的全都是MEF细胞，这个是为什么啊，我的iPS克隆还在板上呢啊，这个是怎么回事啊/ G4 r  ?9 w% ~
我是新手，希望吧里的各位兄弟姐妹多多帮助！:handshake

gact

你已经诱导成功了？# [. R8 p5 m* i1 I8 m. n

SCNT

用PBS洗涤了吗？

christophe

因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清不影响胶原酶IV的活性，无须终止，直接吸弃即可；* |+ ^. ]) R6 b! n& v, [
如果还是消化效果不好，可以再用0.15的胰酶（之前用PBS洗一下）消化1-2分钟，然后血清培养基终止反应，在用枪头吹打一下基本上就能分散开了。

ly200101042

SCNT 发表于 2011-5-15 08:58
" p8 f! D4 ^0 @) @用PBS洗涤了吗？

& d# X4 g  [& r. \: Y* W0 J
洗了啊

ly200101042

christophe 发表于 2011-5-15 12:22
' q/ j  J- x0 ^; x/ C, N( G因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清 ...

! V2 N0 F- i! M6 j3 X呵呵 还行请教下您啊
* B; C- B2 U$ C: }那MEF细胞也一起下来了啊
; J) v8 R. v4 n5 t: g为什么我觉得我iPS细胞比MEF贴壁牢呢啊

ghfvcat

胶原酶IV，室温消化5min？
- F6 I6 e0 D6 f  z5 k1 }时间这么短就能消化下来啊，是小鼠的？好奇怪，消化人的时候一般都要消化上大半个小时的。

牙牙丫丫123

一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……0 B+ y/ m9 w  z' ?6 D2 M3 b$ Y

ly200101042

回复 ghfvcat 的帖子9 T# F/ X5 K" g4 A9 G& a$ @

& i" Q# D& T- l6 f为什么那么长时间啊 ! h! _4 I% R9 Q# k# b2 L3 q! L1 Y4 Y- C
您是说分原代还是已经培养若干代了吗

ly200101042

牙牙丫丫123 发表于 2011-5-15 17:50 - G4 \. O/ K9 H' V. H2 U" g) P
一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……

( }' o) m- m- s( x6 R/ r/ G; t5 o' g我用的是1mg/ml 应该是1%的吧