iPS细胞的传代

ly200101042

我用的是胶原酶IV，室温消化5min后，吸走胶原酶，采用iPS细胞的培养液终止，洗一遍后，用枪头轻轻吹，吹下来的全都是MEF细胞，这个是为什么啊，我的iPS克隆还在板上呢啊，这个是怎么回事啊0 U& v. T+ \( O/ H' ]8 `  p
我是新手，希望吧里的各位兄弟姐妹多多帮助！:handshake

gact

你已经诱导成功了？
& F% N, `0 S2 k. P0 j6 [( |

SCNT

用PBS洗涤了吗？

christophe

因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清不影响胶原酶IV的活性，无须终止，直接吸弃即可；. V/ K4 t6 }2 A9 p! w
如果还是消化效果不好，可以再用0.15的胰酶（之前用PBS洗一下）消化1-2分钟，然后血清培养基终止反应，在用枪头吹打一下基本上就能分散开了。

ly200101042

SCNT 发表于 2011-5-15 08:58 $ g$ y3 F: x3 v8 V3 U+ p
用PBS洗涤了吗？

8 E: C1 Q8 a& Q9 V% W( Z+ ^
洗了啊

ly200101042

christophe 发表于 2011-5-15 12:22 8 K! q3 n7 h$ m
因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清 ...

6 v6 I/ M$ a$ f0 _
呵呵 还行请教下您啊  a6 Z5 [3 B* G0 J2 ~- Z
那MEF细胞也一起下来了啊. D1 y- M  E7 v. X1 h
为什么我觉得我iPS细胞比MEF贴壁牢呢啊

ghfvcat

胶原酶IV，室温消化5min？0 w' x4 K/ s! j7 G
时间这么短就能消化下来啊，是小鼠的？好奇怪，消化人的时候一般都要消化上大半个小时的。

牙牙丫丫123

一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……; |, F" b/ t) o: N+ m: l0 B4 E, o

ly200101042

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( J- Y( h, A, v6 {. |5 L; \, z+ s( P2 w
为什么那么长时间啊 7 }& [  ?1 n% b% q5 ]
您是说分原代还是已经培养若干代了吗

ly200101042

牙牙丫丫123 发表于 2011-5-15 17:50
' D7 e$ u- z) s' e& K2 @+ C. l# q一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……

, L# }7 }1 v+ n& L6 g
我用的是1mg/ml 应该是1%的吧