iPS细胞的传代

ly200101042

我用的是胶原酶IV，室温消化5min后，吸走胶原酶，采用iPS细胞的培养液终止，洗一遍后，用枪头轻轻吹，吹下来的全都是MEF细胞，这个是为什么啊，我的iPS克隆还在板上呢啊，这个是怎么回事啊
' d( s3 p2 W6 |. u* I我是新手，希望吧里的各位兄弟姐妹多多帮助！:handshake

gact

你已经诱导成功了？
5 @9 L) ?, v0 L6 M; ^

SCNT

用PBS洗涤了吗？

christophe

因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清不影响胶原酶IV的活性，无须终止，直接吸弃即可；
9 |' a% D! W6 f# Z+ D" ]6 P如果还是消化效果不好，可以再用0.15的胰酶（之前用PBS洗一下）消化1-2分钟，然后血清培养基终止反应，在用枪头吹打一下基本上就能分散开了。

ly200101042

SCNT 发表于 2011-5-15 08:58
) r& ~$ \/ ^- s% V3 i+ V, [用PBS洗涤了吗？

0 t/ y6 O2 B6 H9 s1 ]2 C* [洗了啊

ly200101042

christophe 发表于 2011-5-15 12:22 / r5 W& V3 ^+ ~4 j4 y$ K! n$ W
因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清 ...

: A* u* W& i; I! E" }) y; Q
呵呵 还行请教下您啊
" t' N& h. F- u$ w  k5 {那MEF细胞也一起下来了啊
) v% u0 |* Y4 A. [: u为什么我觉得我iPS细胞比MEF贴壁牢呢啊

ghfvcat

胶原酶IV，室温消化5min？
2 X* V; J- y6 j% U时间这么短就能消化下来啊，是小鼠的？好奇怪，消化人的时候一般都要消化上大半个小时的。

牙牙丫丫123

一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……
! O. g" m  X1 |( d# k- _" `- S3 Y

ly200101042

回复 ghfvcat 的帖子9 l7 R) [: H/ B8 y/ I% e( u& b; M; k
9 [; ]: l8 @9 d* E
为什么那么长时间啊 3 d) s/ T" H- K) l) N& A3 B5 _; N+ x
您是说分原代还是已经培养若干代了吗

ly200101042

牙牙丫丫123 发表于 2011-5-15 17:50 ! Z$ s) c3 |! h9 N
一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……

0 N3 x# C' O9 I# N我用的是1mg/ml 应该是1%的吧