iPS细胞的传代

ly200101042

我用的是胶原酶IV，室温消化5min后，吸走胶原酶，采用iPS细胞的培养液终止，洗一遍后，用枪头轻轻吹，吹下来的全都是MEF细胞，这个是为什么啊，我的iPS克隆还在板上呢啊，这个是怎么回事啊6 q* F$ V/ g+ a
我是新手，希望吧里的各位兄弟姐妹多多帮助！:handshake

gact

你已经诱导成功了？0 D/ G/ s& w1 }+ z6 i

SCNT

用PBS洗涤了吗？

christophe

因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清不影响胶原酶IV的活性，无须终止，直接吸弃即可；
3 j! e) {! ]4 J! s6 ?$ I如果还是消化效果不好，可以再用0.15的胰酶（之前用PBS洗一下）消化1-2分钟，然后血清培养基终止反应，在用枪头吹打一下基本上就能分散开了。

ly200101042

SCNT 发表于 2011-5-15 08:58
) X! ~2 ?3 j, b6 D  z用PBS洗涤了吗？

, _5 A5 |, O! Z
洗了啊

ly200101042

christophe 发表于 2011-5-15 12:22
0 j  @4 ^. P, d# ^因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清 ...

! u* r" u* }3 F  ~- z0 N呵呵 还行请教下您啊
0 q: |2 ]8 ~4 i" j# Q那MEF细胞也一起下来了啊
% w- G5 o# y! G9 L" _8 [( T, `为什么我觉得我iPS细胞比MEF贴壁牢呢啊

ghfvcat

胶原酶IV，室温消化5min？, J5 O6 o2 r& L# \5 O: C
时间这么短就能消化下来啊，是小鼠的？好奇怪，消化人的时候一般都要消化上大半个小时的。

牙牙丫丫123

一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……
2 u: |# y: k0 H

ly200101042

回复 ghfvcat 的帖子& E/ h9 A/ o7 U) E. @
) x" ]0 v; [6 f9 v
为什么那么长时间啊 5 F& b6 N* x8 S+ Y6 C
您是说分原代还是已经培养若干代了吗

ly200101042

牙牙丫丫123 发表于 2011-5-15 17:50
$ J3 S: |* ^  ]# Y+ Z, R一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……

# K2 c: n1 M( A6 [2 h
我用的是1mg/ml 应该是1%的吧