请教一下，大家做转基因的怎么来挑取克隆细胞？

xiangchou812

细胞转染后用药物筛选一下，可以长出来克隆，不知大家怎么挑取的？
# L7 i0 J" q+ O我用过滤纸法，可能是不得法，细胞不往滤纸上粘，还在皿里。
% U5 M2 G9 ~+ h# `2 _# s, ~$ M欢迎大家讨论，分享自己的经验。

SCNT

最好的方法就是在96孔板或48孔板进行药物筛选，这样很简单就得到单克隆了

xiangchou812

回复 SCNT 的帖子4 F% x; Z) N' m5 ~9 ?

+ }8 M# B7 @+ F$ s# S4 l2 t这样用的板子会不会太多了？

SCNT

回复 xiangchou812 的帖子0 {5 i% V; i" B, z' O$ Z7 W
0 @( r( \" T8 y2 e+ V
虽然用的板子多，但得到的单克隆是相对比较高，也非常容易消化获得单克隆的细胞啊，我们经常用这个方法的

xiangchou812

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5 V; E4 H: ~$ h1 e) N) y5 v" L( S5 q$ Y* T8 K* Q
应该比较纯，好的谢谢你的建议。
7 O+ G6 a3 w, B另外，你们转化后接种时一般密度多少？

SCNT

回复 xiangchou812 的帖子3 B" u" j+ I: }1 h, k, b

! v+ g) l6 A/ I: k7 t0 i这个没有具体的要求，我们也没有计算过具体密度，也不太现实，肉眼观察，差不多就可以

SCNT

还可以在大皿上筛选，使用微量胰酶消化法收集单克隆细胞

军医

回复 SCNT 的帖子. U. J0 ~! ]4 i$ [1 `8 z, m
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这样筛下来，细胞活力会不会没有用96孔板筛的活力好呀，毕竟加药对细胞的活力还是有影响的，我们实验室有时单克隆就扩增不起来了。

xiangchou812

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8 d6 i+ k. I7 V7 k/ P5 j
, t8 E2 N$ O. w& d克隆扩增不起来是很正常的，毕竟体细胞在体外的扩增代数有限，所以说，筛克隆不难，但是想要筛到好的克隆就不那么容易了。

生物化学zy

我们实验室,是用自己做的克隆环(就是自己用那个口服液的小瓶的瓶环,用钳子掰下来,干热160度2h灭菌),用镊子夹着放在克隆上,刚好把克隆套上,之后不要移动克隆环,然后滴加少许胰酶消化,最后加含血清培养液终止即可.其实克隆环就是起着将克隆固定的作用.很好用的.