WB条带丑陋，求鉴定，求指点，煮样不充分orDNA粘稠？

7ubo

2011-6-13 20:20 上传

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如题，6cm的293T用200ul loading buffer裂解的，煮过以后离心是有沉淀的。

lifangamanda

回复 细胞海洋 的帖子; x4 h3 H5 e* x9 k: L3 N8 ^; o1 G
( H2 r5 G0 o& s% [8 O3 \. ~
多谢海洋哥！

7ubo

回复 chb611301 的帖子' x" {5 G8 C3 S
  ^" U% ^( v% f  v4 H6 L  W
APS少加点是不是比较好？

7ubo

回复 wenyangapple 的帖子" w8 ]  r2 b& q$ v

, F/ v& w8 [! e. e$ G$ n& b( x长满的6cm的皿的293T用200ul的SDS loading buffer裂解的，是不是加少了？

chb611301

我觉得先检查一下配的胶，是不是SDS和Aps的问提，胶凝的情况。其次是样品处理一般都是煮样15vmin，都没有问题了。我们常规经验脱脂牛奶封闭要2小时会比较好一些。二抗稀释浓度一般都是1:5000，到1:8000都可以的。

细胞海洋

回复 lifangamanda 的帖子/ s" A( k. G! @- E/ V# `6 j
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点击Zhenhua版回复帖中的回复按钮发言 像我这样 否则他不一定会看到

pheebs

zhenhua 发表于 2011-6-13 21:25 1 K7 {+ k  p- U! j$ I
呵呵，怎么能说自己的data很丑陋呢？. C& w+ g5 Q' o0 T3 X! i
6cm的293T用200ul loading buffer裂解。那你每个泳道上了多少ul呢？
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煮这么久，第一次听说。。。

wenyangapple

回复 hndxws 的帖子/ y3 X* T+ k8 Y2 T
% R- W2 o; j7 }. P
我觉得你这个是蛋白没有提出来，或者提出来的蛋白降解的比较严重。

wenyangapple

回复 7ubo 的帖子
2 f+ v# L, w0 `4 s; {0 f% b8 ^# k8 C# _
右侧是好的结果吧？左侧比较糟糕的data最大的可能性没有裂解开，从上面那些黑色的渣滓量比较的大但是下面条带却很细能看出来。裂解buffer的问题可能是pH不对，或者是SDS or NP-40之类的加的不对。

lifangamanda

Zhenhua版主，煮样温度，温度？？？谢谢！